O型口蹄疫病毒RT-PCR检测试剂盒

特别提示：包括O型口蹄疫病毒RT-PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：O型口蹄疫病毒RT-PCR检测试剂盒
英文名称：Foot-and-mouth disease type O viruses RT-PCR Kit
产品货号：BTN11-1760
产品规格：50次

本公司针对O型FMDV设计了特异性检测引物，建立了检测FMDV的RT-PCR方法，敏感度更高。

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）由口蹄疫病毒（FMDV）引起的多种偶蹄动物高度接触性传染病。口蹄疫病毒属于小核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，病毒基因组为单股正链RNA，约含8500个核苷酸。目前已知该病毒有7个血清型，分别为O、A、C、Asial、SATl、SAT2和SAT3，每种血清型包括多个亚型，各型之间无交叉保护。我国及周边国家流行O型、A型和Asial型3种血清的FMDV。口蹄疫病对畜牧业生产危害性极大，是世界各国检测和防疫的重点对象。由于FMDV传代速度快且有多种传播途径，特别是康复和亚临床感染动物及其畜产品（主要为肉、奶类）带毒，给FMD的防疫工作带来诸多困难。目前检测FMD常用技术主要有动物接种，病毒分离和血清学试验等，这些方法有的费时费力，有的存在非特异性反应和敏感度低等缺点。

产品特点：
1. 用于O型FMDV的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中FMDV进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式RT-PCR试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
双酶一管式RT-PCR Buffer，2×	BTN91202A	750 μL
MMLV-Taq Mix	BTN91202B	100 μL
O型FMDV专一性引物对	yw11651166	200 μL
O型FMDV阳性对照	t11651166	50 μL
超纯水	BTN	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

除了O型口蹄疫病毒RT-PCR检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：博卡病毒(HBocaV)单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA184
规格：48次/盒

名称：脊髓灰质炎病毒2型单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA206
规格：48次/盒

名称：手足口病科萨奇A16病毒(CoxA16)单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA212
规格：48次/盒

名称：札如病毒/星状病毒/腺病毒三重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA218
规格：48次/盒

名称：新疆出血热病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA243
规格：48次/盒

名称：麻疹病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA247
规格：48次/盒

名称：禽传染性喉气管炎病毒单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA773
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对禽传染性喉气管炎病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用一步法荧光RT-PCR技术对禽传染性喉气管炎病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断

二、用途：
该试剂盒适合于检测气管渗出物、支气管和肺组织、肾脏或输卵管等标本中禽传染性喉气管炎病毒(AILT)RNA，用于禽传染性喉气管炎病毒(AILT)感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
禽传染性喉气管炎荧光qRT-PCR反应液(AILT-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(AILT-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙*胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(AILT-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(AILT-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(AILT-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明AILT核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明AILT核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行AILT qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明AILT核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管zuì好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。