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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 库存：
大量
- 生长状态：
贴壁生长
- 运输方式：
干冰
- 英文名：
[TKB-1细胞]
- 规格：
详见说明书
基本特性
细胞生长：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞数量：1×106个细胞数
细胞纯度：95％
细胞活力：87％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
产品注明
细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）
细胞运输：干冰运输（1Vial）或活细胞运输（T-25flasks）
细胞用途：只可用于科研不可用于临床诊断和治疗
[TKB-1细胞]人肺癌细胞处理程序
在培养瓶中接种细胞并在培养基中完全填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。
1、收到后，目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。
使用倒置显微镜（配备有相位传感器），仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部？在运输过程中，培养物有时被粗略地处理，并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中（但仍然是可行的）。
2、如果细胞仍然附着，无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中，在37℃下培养细胞，直到它们准备进行传代培养BGC-823人胃腺癌细胞（低分化）没有附着，无菌地移除烧瓶的全部内容物，并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下，在37℃下孵育，直至细胞准备进行传代培养。
[TKB-1细胞]人肺癌细胞冷冻保存程序
1、去除和丢弃培养基。
2、简要冲洗细胞层0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。
3、加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的（通常在1到10分钟）。
注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。
4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。
5、去除胰酶EDTA溶液，将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。
6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。
7、将细胞转移至低温瓶，1ml／瓶。
8、低温容器中的细胞Frozen（NalgENα5100-01）。
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文献和实验littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库，但我不是这个方面科班出身，好多地方还不是很明白，想请教师兄师姐的经验，应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗？非常感谢！！ neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵 littleyan0418
我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如： （１） Ａ５４９（肺腺癌） （２） ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌） （３） ８０１（非小肺细胞癌） （４） ＮＣＩＨ４６０ （大细胞肺癌） 在消化传代过程中，步骤基本一致： 吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液－＞加入一定量的新培养液－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞
所需的D-HANK'S液和胰酶和用1640配置的适当浓度小牛血清最好都放在37度预热十分钟左右，让它们和细胞生长环境的温度是一样的。这样能达到既对细胞没有外来刺激的作用又能达到反应的最佳条件。我用的是小培养瓶，方法是:先把旧的培养液倒掉，用D-HANK'S大约3ml洗一次，加浓度为0.1%的胰酶进行消化，添加量只要能均匀的覆盖培养瓶底，大约要1.5ml，最好把瓶盖旋紧放到37度培养箱里培养3-5分钟，在显微镜下观察细胞收缩，变圆，加入3ml的10%的血清终止消化。小心仔细的吹打培养瓶底使细胞
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