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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
89
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
裂解液室温保存;抑制剂-20℃
- 规格:
50ml/100ml
特别提示:包括RIPA裂解液(蛋白裂解液)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:RIPA裂解液(蛋白裂解液)
产品货号:HR0259
产品规格:50ml/100ml
RIPA裂解液采用优质原料配制,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用,是经典常用的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等下游实验。
RIPA裂解液中已含常用磷酸酶抑制剂。
储存条件:裂解液室温保存;抑制剂-20℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。
● 整个过程须保持样品处于低温状态。
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
使用方法:
A、细胞裂解
1.裂解液制备:每 1ml冷的RIPA裂解液中加入4μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2.取5-10×106个细胞,在4℃,1000rpm条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3.用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4.每 5×106个细胞中加入500μl冷的裂解液(每106个细胞加100μl RIPA裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100μl~150μl,或一个75 cm2培养瓶加1~2ml。裂解液和细胞应充分接触。如果RIPA裂解液不足量,细胞裂解效
率将会降低),混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。
5.在 4℃,14000rpm条件下离心15分钟。
6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
B.组织裂解
1.裂解液制备:每 1ml冷的RIPA裂解液加入4μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2.取100mg组织样本剪碎,加入1ml裂解液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3.将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中,在4℃,10000rpm条件下离心5分钟。
4.将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
除了RIPA裂解液(蛋白裂解液),,我公司还供应以下相关产品:
BTN130528 植物专用蛋白酶抑制剂 1mL
BTN80810 一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装 30次
YT038 Western及IP细胞裂解液 100ml
YT619 SDS-PAGE电泳液 1L|10×1L
YT623 30% Acr-Bis (29:1) 100ml
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WE0322 IHC复染试剂(改良型苏木素) 10ml
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SNM418 全蛋白提取试剂盒 50T
SNM471 免疫组化用苏木素染色液 50ml
RFT156 RIPA裂解液(强) 100ml
SY0303 CHAPS 1g
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HR0035 植物组蛋白提取试剂盒 50T/100T
HR0107 真菌膜蛋白提取试剂盒 50T/100T
HR0392 透析袋27mm,截留分子量14kd 1卷,5M
HQF21 Protien A-HRP 1mg/10mg
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文献和实验1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g (1%)0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml (1%)Aprotinin
液)。③10000rpm,4℃离心10min,取上清转移至新管。④用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。⑤用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80℃储存。⑥按照1:1体积比混合2×样品缓冲液,煮沸5min后,室温放置5min.⑦短时离心后点样电泳检测。B. 制备组织裂解液:①在制备过程中一直将溶胞液或组织放在冰上。②切开组织,称取组织1.5g于PBS中清洗。③在RIPA缓冲液中剪碎组织后,转移到匀浆器中,加足5ml RIPA缓冲液,研磨20min.④将研磨液转移到1.5ml的离心
保存。 13、如何鉴定提取的外泌体? 通常会用到:透射电镜检测(形态)、NTA 粒径检测(大小)、Western Blot 检测等方法对提取的外泌体进行鉴定。在进行 Western Blot 检测时,常用的外泌体标志蛋白有CD63、CD9、CD81、TSG101 等。 14、提取的外泌体进行 Western Blot 前是否需要加入 RIPA 试剂裂解? 需要。一般按照 1:1 的比例加入强 RIPA 试剂,或推荐使用外泌体蛋白专用裂解液。 15、进行外泌体 Western Blot 鉴定时有无内参
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