苯基-琼脂糖凝胶H.P.

特别提示：包括苯基-琼脂糖凝胶H.P.在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：苯基-琼脂糖凝胶H.P.
英文名称：Phenyl-Sepharose H.P.
产品货号：QN4077
产品规格：25ml

苯基-琼脂糖凝胶H.P.是将苯基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

技术参数：
配基：R-OCH2-CH(OH)-CH2-O-C6H5
基质：6%交联琼脂糖
粒径：24～44μm
配基密度：25μmol苯基/mL介质
推荐流速：zuì高100cm/h(内径16mm、柱长10cm，柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/L NaCl)
耐压：0.15MPa
工作温度：4～40℃
pH适用范围：2～14(短时间，在位清洗)；3～13(长时间)
化学稳定性：1mol/L醋酸、8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍、30%异bǐng醇、70%乙醇、2%SDS，在以上溶液中稳定
保存：密封贮存在4～30℃(保存溶液为20%乙醇+0.1M醋酸钠)，通风、干燥、清洁的地方，不能冷冻，保质期5年，用过的柱子贮存在4℃(20%乙醇)。

操作步骤：
1．装柱
① 让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
② 根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2～3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2．平衡
  让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02～0.05mol/L的PBS加1～2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3．上样
① 样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
② 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
③ 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。
4．洗脱
  疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。zuì常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如0.02～0.05mol/L的PBS。
5．再生
  一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6．在位清洗
① 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
② 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH去除。
③ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4～10倍柱体积的70%乙醇或30%异bǐng醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
7．注意
  在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
8．去热源
  用0.5M的氢*化钠清洗柱子5～6小时或用0.1M的氢*化钠24小时。或用以下方法步骤去除：
① 2倍柱体积的70%乙醇；
② 2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；
③ 1倍柱体积4M尿素；
④ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl；
  上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
9．消毒 用0.5～1M NaOH室温下洗8～10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

除了苯基-琼脂糖凝胶H.P.,，我公司还供应以下相关产品：



名称：羧甲基纤维素钠(粘度300～800)
货号：QN3987
规格：25g

名称：XAD7HP吸附树脂
货号：QN4043
规格：100g
XAD7HP吸附树脂属弱极性吸附树脂，可用于分离多肽等物质。可用于分子量高达60,000的化合物的弱极性吸附剂树脂，具体用途包括胰岛素、黄腐酸和腐殖化合物的吸附，干燥废弃物、有机物的去除和回收，以及抗生素的回收。

名称：葡聚糖凝胶G-10
货号：QN4046
规格：25g|100g|500g
葡聚糖凝胶G-10利用分子筛作用，进行缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子。

CAS：9050-68-4
凝胶类型：凝胶过滤填料，亲水型凝胶
结构成分：交联葡聚糖
粒   径：40-120µm
工作PH值：2-13
操作温度：4-40℃
球蛋白分离范围：≤700
保存条件：4-25℃

名称：钠型732阳离子交换树脂
货号：QN4049
规格：500g
钠型732阳离子交换树脂的使用方法：
1．树脂预处理。
  732树脂是强酸性苯乙*系阳离子交换树脂，新树脂在使用前，需进行予处理。将准备装柱使用的新树脂，先用70-80℃的热水（清洁的自来水即可）反复清洗。开始浸洗时，每隔约15分钟换水一次，浸洗时要不时搅动，换水4-5次后，可隔约30分钟换水一次，总共换水7-8次，浸洗至浸洗水不带褐色，泡沫很少时为止。也可用10％氯化钠溶液浸泡树脂24小时，然后用清水冲洗至洗水无色为止。
2．酸处理。
  酸处理zuì好在交换柱中进行，先用湿法装柱法将树脂放入柱内。用1N盐酸缓慢流过树脂，用量约为强酸阳树脂体积的2-3倍，每小时1.5倍床层体积流过。酸进完后，再浸泡1小时左右。然后用水冲洗，至出水PH为5左右为止。
3．碱处理。
  用1N NaOH流过树脂，用量及流速与1相同。碱进完后，同样再浸泡1小时左右。然后用水冲洗，至出水PH为9左右为止。
4．转型。
  若需用H型，则用1N盐酸或硫酸，将树脂转成H型，用量为树脂体积的3-5倍，流速与1相同。酸流完后，用去离子水冲洗至出水PH值为6以上时，即可投入使用。
  若用Na型，则不必转型，于碱处理完成后，即可投入使用。但冲洗树脂用水需用去离子水。
5．再生。
  再生前，先将树脂反洗至出水无色透明。
  H型树脂用1N HCL、Na型树脂用1N NaoH（也可用8％的NaCL溶液）过柱，用量为柱脂体积的2－3倍，流速为每小时1倍床层体积。
  再生液过完后，用去离子水洗柱至出水至中性，即可再次投入使用。

储存条件：RT

名称：DEAE葡聚糖凝胶A-50
货号：QN4058
规格：25g
DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85-7.5)，其余均属酸性蛋白。在PH7.2-7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分离获得纯化的IgG。

基质：Sephadex
颗粒大小：40～120μm
zuì大流速：45cm/h
工作pH：pH2.0～9.0
储存条件：室温

实验步骤：
1．预处理
称DEAE-Sephadex A-50(下称A-50)5克，悬于500ml蒸馏水，1小时后倾去上层细粒。按每克A-50加0.5M NaOH 15ml的比例，将A-50浸泡于0.5M NaOH中，搅匀，静置30分钟，装入布氏漏斗(垫有2层滤纸)中抽滤，并反复用蒸馏水抽洗至PH呈中性；再以0.5M HCl同上操作过程处理，zuì后以0.5M NaOH再处理一次。处理完后，将A-50浸泡于0.1M，PH 7.4 PB中过夜。
2．装柱
① 将层析柱垂直固定于滴定铁架上，柱底垫一园尼龙纱，出水口接一乳胶或塑料管并关闭开关。
② 将0.1M，PH7.4 PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入经预处理并以同上缓冲液调成稀糊状的A-50。待A-50凝胶沉降2～3cm厚时，启开出水口螺旋夹，控制流速1ml/分钟，同时连续倒入糊状A-50凝胶至所需高度。
③ 关闭出水口，待A-50凝胶完全沉降后，柱面放一园形滤纸片，以橡皮塞塞紧柱上口，通过插入橡皮塞之针头及所连接的乳胶或塑料管与洗脱液瓶相连接。
3．平衡
启开出水口螺旋夹，控制流速12-14滴/分钟，使约2倍床体积的洗脱液流出。并以PH计与电导仪分别测定洗脱液及流出液之PH值与离子强度是否相同。达到一致时关闭出水口，停止平衡。
4．加样及洗脱
启开上口橡皮塞及下口螺旋夹，使柱中液体缓慢滴出，当柱面液体与柱面相切时，立即关闭出水口，以毛细滴管沿柱壁加入样品(体积应<床体积的2％，蛋白浓度以＜100mg为宜)。松开出水口螺旋夹使柱面样品缓慢进入柱内，至与柱面相切时，立即关闭下口，以少量洗脱液洗柱壁2-3次；再放开出水口，使洗液进入床柱，随后立即于柱面上加入数ml洗脱液，紧塞柱上口，使整个洗脱过程成一密闭系统。并控制流速12～14滴／分钟。
5．收集
开始洗脱的同时就以试管进行收集。每管收集3～5ml。共收集10～15管。
6．测蛋白
以751-G型紫外分光光度计分别测定每管OD280nm，与OD260nm，按前述公式计算各管蛋白含量。并以OD280nm为纵座标，以试管编号为横座标，绘制洗脱曲线。
7．合并、浓缩
将洗脱峰的上坡段与下坡段各管收集液分别进行合并，以PEG(MW6000)洗缩至所需体积，加入0.02％NaN3防腐剂，于4℃保存备用。
8．A-50凝胶的再生
在柱上先以2M NaCl洗柱上的杂蛋白至流出液的OD280nm＜0.02，再以蒸馏水洗去柱中盐。然后按预处理过程将A-50再处理一遍即达再生。近期用时泡于洗脱缓冲液中４℃保存；近期不用时，以无水酒*洗2次，再置50℃温箱烘干，装瓶内保存。

注意事项：
1．柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就得获得理想的分辨率，但由于层析柱流速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低。柱的直径增加，使液体流动的不均匀性增加，分辨率明显下降。
2．纯化过程必须严格控制脱缓冲液的PH及离子强度。样品与A-50凝胶必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。
3．所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。
4．洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。
5．上样的体积要小，浓度不宜过高。
6．加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。