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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
222
- 英文名:
DEAE Sephadex A-25
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
- 规格:
25g|100g|500g
特别提示:包括DEAE-葡聚糖凝胶A-25在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:DEAE-葡聚糖凝胶A-25
英文名称:DEAE Sephadex A-25
产品货号:QN3990
产品规格:25g|100g|500g
除了DEAE-葡聚糖凝胶A-25,,我公司还供应以下相关产品:
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规格:25ml
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外观:颗粒
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货号:QN4068
规格:25ml
肝素琼脂糖凝胶用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。
肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖,将它偶联到活化的琼脂糖凝胶上,该填料具有很高的物理化学稳定性。 肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合,所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。
技术参数:
特点:基团脱落少,结合特异性强
基质:6%的琼脂糖凝胶
配基:肝素
吸附载量:2~3mg抗凝血因子Ⅲ/ml
亲和填料粒径:45~165μm
zuì大流速:300cm/h
pH范围:pH4.0~10.0,在位清洗时pH范围可到pH3.0~13.0
使用温度:4℃~室温
保存温度:4~8℃
保存液体:20%乙醇
使用方法:
1.装柱
① 将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
② 根据柱子大小取所需凝胶的量,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1比例)配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意不要使用气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2.平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
3.上样
① 样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心、过滤后上柱;
② 一般用20~50mM,pH7.4~8.0的缓冲液,为避免离子交换的干扰,缓冲液中可以适当加50~100mM的NaCl,,zuì常用的为Tris-HCl缓冲液。
4.洗脱
可以用Ph7.4-8.0的缓冲液加0.2-2M NaCl进行阶段或者线性洗脱。再生
5.再生处理
先用0.1M Tris-HCl,pH7.0缓冲液洗3个柱床体积,然后用0.1M NaOH含2MNaCl流洗3个床体积,zuì后用20%乙醇3个床体积即可。长时间用酸碱洗填料会是填料的吸附能力下降,所以清洗要尽量缩短时间
注意事项:
1.该凝胶从冷室或冰箱中取出后zuì好在室温下缓慢振摇恢复到室温,然后再装柱,以免产生气泡影响柱效。
2.吸附:20-50mM,pH7.4-8.0的缓冲液,为避免离子交换的干扰,缓冲液中可以适当加50~100mM的NaCl,,zuì常用的为Tris-HCl缓冲液。
3.洗脱:可以用pH7.4-8.0的缓冲液加0.2-2M进行阶段或者线性洗脱。
4.上样样品必须与平衡柱子的缓冲液的pH、电导相同。
5.不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。
6.肝素琼脂糖凝胶亲和填料的再生处理方法:先用0.1M Tris-HClpH7.0缓冲液洗3个柱床体积,然后用0.1M NaOH含2M NaCl流洗3个床体积,zuì后用20%乙醇洗3个床体积即可。长时间用酸碱洗填料会是填料的吸附能力下降,所以清洗要尽量缩短时间。
7.该亲和填料保存条件为20%乙醇,4~8℃。
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文献和实验DEAE-葡聚糖介导的转染,其原理还不清楚,可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核,此法只适合暂时转染实验,转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系,可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(30分钟-1.5小时),又可用较低浓度(250g/L)的DEAE-葡聚糖作用较长时间(8小时)。 方法如下: 1. 接种鼠L成纤维细胞浓度为5×105CO2 /孔/皿生长2~3天,当达50%板底面积可用。
相关专题 总有一种转染方法适合你 DEAE-葡聚糖介导的转染 ,其原理还不清楚,可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核,此法只适合暂时转染实验,转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系,可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(30分钟-1.5小时),又可用较低浓度(250g/L)的DEAE-葡聚糖作用较长时间(8小时)。 方法如下:
。分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻,不能进入凝胶颗粒内部,阻滞作用小,随着溶剂在凝胶颗粒之间流动,因此流程短,而先流出层析柱;分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内,阻滞作用大,流程延长,而最后从层析柱中流出。若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间,则在两者之间从柱中流出,由此就可以达到分离目的。 本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体,来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×10 6 , 而溴酚
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