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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 英文名：
ECL 法生物素杂交检测试剂盒
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
5次
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
点击了解更多探针标记及检测产品：
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是ECL 法生物素杂交检测试剂盒5次说明书的相关产品：
氟比洛芬(国产)5104-49-4质量规格：>98%,国产美仑
氟比洛芬(进口)5104-49-4质量规格：>98%,原装进口
氟比洛芬（标准品）5104-49-4质量规格：HPLC>98%,标准品
磷霉素钙（水溶）26016-98-8质量规格：>98%
磷霉素钠26016-99-9质量规格：>96%
愈创甘油醚（标准品）Guaifenesin质量规格：含量测定
盐酸氯哌丁（标准品）Cloperastine hydrochloride质量规格：供TCL鉴别用
甘露醇（标准品）Mannitol；D-Mannitol质量规格：含量测定
甘露醇（标准品）Mannitol；D-Mannitol质量规格：供HPLC法测定
依克立达Elacridar;GF120918;GW0918质量规格：>98%,P糖蛋白抑制剂
异烟酸质量规格：>98%,BRIsonicotinic acid
L-苹果酸质量规格：>98%,BRL-Malic acid
蛋白酶K溶液(20 mg/ml)质量规格：20 mg/mlProteinase K Solution, 20 mg/ml
多聚赖氨酸0.1%溶液质量规格：M.W:150,000~300,000Poly-L-lysine solution ( 0.1%)
盐酸四环素溶液,50 mg/ml质量规格：50 mg/ml,灭菌装Tetracycline hydrochloride solution, 50 mg/ml, sterile
鲍曼不动杆菌 缺陷短波单胞菌 ATCC 19146
营养琼脂培养基90mm 生孢梭菌CMCC64941冻干粉
紫红曲霉 地衣形芽孢杆菌
蜃楼耶尔森氏菌 紫红曲霉
卡尔斯伯酵母 深红酵母
痤疮杆菌 金黄色葡萄球菌金黄色亚种 抗生素测定菌株
胶红酵母 金黄色葡萄球菌ATCC43300冻干粉
Hyphomonasadhaerens 红串红球菌
嗜热乳酸链球菌AS1.1864冻干粉 皂味口磨
白球拟酵母 珊瑚色诺卡氏菌
ECL 法生物素杂交检测试剂盒5次说明书发光假蜜环菌 扣囊内孢霉
粘红酵母 长野解普鲁兰杆菌
鲁氏毛霉 宇佐美曲霉
pH7.0-蛋白胨缓冲液200ml 大秃马勃
单核增生李斯特菌 化脓性链球菌
操作步骤:
1. ECL 法生物素杂交检测试剂盒5次说明书匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
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文献和实验(All steps with agitation, unless done O/N at 4℃)►Rinse membrane once in TBS-T►Block the membrane with TBS-T/ 5% milk (or HIHS) for 30 min room►temp (can be left at 4℃ O/N here)►Rinse membrane briefly 2X with TBS-T and then once for 10 min with TBS
最佳结果。 注意：荧光在一段时间后会越来越弱。 记得全程手套操作，一则避免手印污染影响结果，二则保护自己（未交联的丙烯酰胺、甲醛等等虽不立即致命但都会慢慢毒害你的身体） 1. 如果WB前没有可参考的资料--比如不知道是否有表达，比如抗体少还要摸条件（稀释度），可以用剪膜剩下的边角料来先做几组点杂交摸条件，省点时间省点试剂； 2. 去掉积层胶后，预染的Marker可用以识别胶上下方向和膜的正反面（预染Marker如果照着说明书用量，有可能在电泳时看不到条带，但转膜时有浓缩效应
Western blotting using ECL reagent
REAGENTSECL Western blotting kit (Amersham Life Science; cat# RPN2108): contains second antibodies for both mouse and rabbit, substrate and milk blocker (the milk blocker is not normally used when using ruminant samples).Hybond ECL nitrocellulose
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