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文献和实验的cRNA用于杂交和每一步的样品分析,Affymetrix公司推荐用1μg以上的mRNA(最少0.2μg以上)或者5μg以上的总RNA开始合成cDNA。以HPLC纯的T7-(dT)24 Primer(推荐选用GENSET公司的产品,要求是HPLC纯的,PAGE胶纯化的引物在这里不适用)作为逆转录引物合成cDNA。由于引物中带有T7序列,因此合成的cDNA的3'端也带有T7序列。选用Affymetrix公司提供的Enzo BioArray HighYield RNA Transcript Labeling
的,PAGE胶纯化的引物在这里不适用)作为逆转录引物合成cDNA。由于引物中带有T7序列,因此合成的cDNA的3'端也带有T7序列。选用Affymetrix公司提供的Enzo BioArray HighYield RNA Transcript Labeling Kit(Cat. No. 900182,10次标记),通过试剂盒提供的生物素标记的核糖核酸和T7 RNA聚合酶,以体外转录(IVT)的方式扩增并标记cRNA探针。试剂盒提供体外转录和标记的所有试剂,可以作10个反应。标记好的探针经过随机片断
combs. I also us a 250bp ladder. We use the Ambion MEGAscript T7 kit (Cat.# : 1334) for the transcription reaction. Follow the Ambion MEGAscript kit protocol for Transcription Reaction Assembly and use 5 µl of PCR template per 20 µl reaction
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