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- xuanya
- 美国/中国
- XY-TE-0904
- 2025年11月22日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
E.coli DH10B Chemical Competent Cell
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是采用大肠杆菌 DH10B 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的化学转化。本试剂盒具有下列特点：
1. 使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108，-80℃保存几个月转化效率不发生改 变。
2. 可用于高效转化 150Kb 大小的质粒，可用于蓝、白斑筛选。
3. DH10B 菌株基因型： F - mcrA Δ(mrr -hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG
4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。
大肠杆菌DH10B感受态细胞运输及保存：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
大肠杆菌DH10B感受态细胞使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL， 可以根据实际情况分装使用。以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况 加入适量的 DNA，通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀 后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
大肠杆菌DH10B感受态细胞注意：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产 物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平 板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分 培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再 倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下 的菌液再涂布新培养基进行培养。
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文献和实验Prior to getting cells:1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg.2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice.3) One tube of cells is good for several transformations.For two transformations:1) Put 10 μl of your ligation
实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
(Meselson68) 2. nalidixic acid resistant DH10B F- endA1 recA1 galU galK deoR nupG rpsL ΔlacX74 Φ80lacZΔM15 araD139 Δ(ara,leu)7697 mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) λ- 1.suitable for cloning
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