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- xuanya
- 美国/中国
- XY-TE-0892
- 2025年12月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
E.coli TOP10 Chemical Competent Cell
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是采用大肠杆菌 TOP10 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的化学转化。该菌株是一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重 级缺陷的抑制型株，其φ80lacZΔM15 基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨 基端实现α 互补，可用于蓝白斑筛选。使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108。本感受态细胞具有链霉素抗性。
菌株的基因型：F - mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL(Str r ) endA1 nupG
大肠杆菌Top10化学感受态细胞运输及保存：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
大肠杆菌Top10化学感受态细胞使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl， 可以根据实际情况分装使用。 以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况 加入适量的 DNA，通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃ 直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。
大肠杆菌Top10化学感受态细胞注意：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平 板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分 培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测一次OD600nm，至OD600nm≤0.5时停止培养；(2) 每组取培养液3个2ml转入2ml离心管中，在冰上冷却20-30min，于4℃，4000r／
酶和甲基化酶的突变体（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法（如电击法，CaCl2，RbCl（KCl）等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞（Compenent cells）。进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（Transformant，即带有异源DNA分子的受体细胞）。目前常用的感受态细胞
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