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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
两年
- 英文名:
E.coli TG1 Chemical Competent Cell
- 库存:
900
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是采用大肠杆菌 DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于 DNA 的 化学转化。使用 pUC19 质粒检测本产品,转化效率可达 108。本产品为 dam-,dcm-的菌 株,能够排除 dam,dcm 甲基化的影响。
菌株基因型为:supE hsdΔ5 thi Δ(lad-proAB) F+ [traD36 proAB+ lacIQlacZΔM15]

大肠杆菌TG1化学感受态细胞运输及保存:
干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
大肠杆菌TG1化学感受态细胞使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL,可以根据 实际情况分装使用。 以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实际情况加入适量 的 DNA,通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用移液器 轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 45 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃ 摇床,150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体 琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃直至液体被吸收, 倒置培养,37℃培养 12-16 小时。
大肠杆菌TG1化学感受态细胞注意:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板; 若转化的 DNA 总量较少,可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较 少,可通过离心(4,000 rpm,2 分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于 平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。
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文献和实验实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系,使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞: 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株,常用 RM 符号表示。转化方法:电击
4.操作步骤 1)大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落,接种于3~5ml LB液体培养中,37℃振荡培养12h左右,直至对数生长期。将该菌悬液以1:100~1:50转接于100ml LB液体培养基中,37℃振荡扩大培养,当培养液开始出现混浊后,每隔20~30min测一次OD600nm,至OD600nm≤0.5时停止培养;(2) 每组取培养液3个2ml转入2ml离心管中,在冰上冷却20-30min,于4℃,4000r/
酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法,CaCl2,RbCl(KCl)等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Compenent cells)。进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子(Transformant,即带有异源DNA分子的受体细胞)。目前常用的感受态细胞
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