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- XY-TE-0988
- 2025年11月22日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
E.coli Top10F' Strain
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
大肠杆菌 TOP10 菌种是一种用于克隆和质粒制备的 K-12 系菌种。它有 下列特点：
1. 核酸内切酶缺陷，能够有效提升制备的质粒 DNA 的质量。
2. 三条重组途径均失去活性，能够有效提高 DNA 插入片段的稳定性。
3. EcoK 甲基化修饰和限制系统缺失，故可用 EcoK 位点甲基化和非甲基化 的 DNA（如 PCR 产物）进行转化并制备非甲基化的 DNA。
4. McrA、McrBC 和 Mrr 三套依赖于甲基化的限制系统缺失，可用甲基化 的 DNA（如基因组 DNA）进行转化制备非甲基化的 DNA。
5. 如果质粒携带-半乳糖苷酶片段，则可用蓝白筛选法筛选重组子。
6. 具有链霉素抗性和 2-脱氧半乳糖抗性。
大肠杆菌Top10F'菌种基因型
大肠杆菌 TOP10 菌种的基因型是：K-12, F ，araD139, Δ(ara-leu)7697, deoR,endA1, 80lacZM15,galU, galK, ΔlacX74, mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrB C), nupG, recA1, rpsL(SmR )
大肠杆菌 TOP10 菌种基因型符号及其含义列表如下：
大肠杆菌Top10F'菌种运输及保存：
低温运输，-80℃保种保存，有效期一年。
大肠杆菌Top10F'菌种使用方法
本产品可用于常规大肠杆菌感受态细胞制备、转化等实验，具体步骤请见分子克隆手册等工具书。
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文献和实验-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
表达要根据具体情况而定。二、材料1、诱导表达材料(1 )LB （Luria—Bertani）)培养基酵母膏 (Yeast extract)5g 蛋白胨 (Peptone)10gNaCl10g 琼脂 (Agar)1-2%蒸馏水 (Distilled water)1000ml pH 7.0适用范围：大肠杆菌(2 )IPTG 贮备液：2 g IPTG溶于10 ml 蒸馏水中，0 .22 μm 滤膜过滤除菌，分装成1 ml /份，－20 ℃ 保存。(3 )l× 凝胶电泳加样缓冲液：50 mmol / L Tris
基作点种分离纯化，挑选在补充培养基生上生长而在基本培养基上不生长的单菌落划YPD平板，4℃保存。2、pPICZαA原核宿主菌TOP10F’的活化培养TOP10F’做为菌种保存在－70℃条件下，在进行扩大培养抽提质粒之前，先要进行活化培养。接种TOP10F’于5ml LLB（加入25ug / ml Zeocin）中，37℃，200 rpm ，培养16～18小时。3、毕赤酵母表达的试验方法3.1线状质粒DNA的脱磷酸化处理重组载体只有被酶切线性化整合效率才能大大提高，环状质粒整合效率是很低的。选用不同
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