SP6体外转录试剂盒产品及特点: 本试剂盒是基于 SP6 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒,它利用含有 SP6 启动子的模版 DNA,以 NTP 为底物,从 SP6 启动子下游开始合成与模版 DNA 中一条链互补的 RNA,简单快速获得大量的 RNA 分子。本产品具有下列 特点: 1. 即开即用,用户只需提供含 SP6 启动子的 DNA 模板即可以进行体外转录实 验,不需要单独准备每一个成份。 2. 单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。 3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA,也可以是 PCR 扩增产物。 4. 可以合成的 RNA 的最佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。 5. 产品配方经过精心优化,每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA蛋白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰(RNAi)等实验。
SP6体外转录试剂盒运输及保存: 低温运输,-20℃保存, 有效期一年。 自备试剂:如果需要去除转录产物中的 DNA 模板,则需要自备 RNase-free DNase、Tris 饱和酚、氯仿、微量核酸沉淀剂、RNase-free 75%乙醇(均可从本公司另购)
SP6体外转录试剂盒使用方法 一、制备 DNA 模板 PCR 片段和质粒 DNA 都可以用作体外转录的模板,但是必须注意以下几点。 一是必须使用线性化的 DNA。如果是质粒 DNA,则必须先用适当的限制性 内切酶切成线状。 二是需要转录的 DNA 序列的上游必须有 SP6 启动子。如 果模板是 PCR 产物,则可以在设计引物时将 SP6 启动子序列(5’ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3’)加上,转录其实是从 3 端 G AGN G 中 的第一个 G 开始。如果是将 DNA 片段克隆到载体上,则需要选择有 SP6 启动子的载体,并且克隆位点必须位于 SP6 启动子下游。 三是需要转录的 DNA 序列的下游端最好不要是 3’突出。如果是 3’突出(如选择了 Pst I 来线性化质粒),则最好用 T4 DNA 聚合酶修平。 四是必须保证 DNA 模板 中没有 RNase。由于提取质粒 DNA 的过程中一般要使用大量的 RNase A, 因此质粒 DNA 一般都有严重的 RNase A 污染,所以在用作模板前,最好采 取胶回收得方法回收质粒 DNA。并且加入少量总 RNA 一起保温,然后电泳 检测 RNA 是否被降解,以此判断纯化的 DNA 模板是否有残留 RNase A。