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- XY-TE-0552
- 2026年05月19日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Column DNA BACK
- 库存：
890
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系，可以从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中高效快速回收DNA片段，回收效率可达50-90%（跟片段大小相关）。本产品的特点如下:
1.高效，回收效率最高可达90%（跟片段大小和胶浓度等因素有关），可以跟跟国外著名厂家的产品媲美。
2.快速，整个过程只需要十余分钟。洗脱液不需要额外加乙醇。
3.两用，既可用于胶回收，也可以用于PCR或其他酶反应回收。
4.范围广，回收DNA的长度范围为50bp-40Kb（但效率各不相同）。
5.能回收单链、双链及环状DNA，最大吸附量为10ug。
6.回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR、测序等多种分子生物学实验。
7.本试剂盒足够纯化50片含DNA的琼脂糖凝胶条（每片胶条重量不超过250mg），可以纯化50次酶反应（包括PCR反应，每次体积不超过250uL）。
核酸胶回收运输及保存：
常温运输及保存，有效期为一年。由于通用溶胶液2.0是高盐溶液，因此在低温时容易产生沉淀。如果产生沉淀，需要60℃加热溶解后才可以使用。
自备试剂：IPA
核酸胶回收使用方法
一：对胶回收：
1.用干净的刀片切取含DNA片段的琼脂糖凝胶（100mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入一干净的1.5mL塑料离心管（自备）中称重，按重量比为1：2的比例加入通用溶胶液2.0(0.1g的琼脂糖凝胶需要加入0.2mL的通用溶胶液2.0)。如果琼脂糖凝胶的浓度大于2%，则需要按1：3的比例加入通用溶胶液2.0溶解胶块。
2.50℃保温10分钟使胶完全溶化，每隔2-3分钟振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在300bp以下，建议不要50℃保温，而是延长溶胶时间，以免DNA变性，影响回收率。
3.在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的IPA（对100mg胶块，加50uL），快速振荡10秒混匀。
5.将溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，静置3分钟。注意：静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。本产品提供的离心吸附柱的最大上样体积为0.8mL，若溶胶液的总体积大于0.8mL，一次加不完，可以分多次将溶液加入到吸附柱中。
6.12000-15000g离心1分钟，倒掉收集管中的穿透液。
7.加入0.7mL通用洗柱液于离心柱中，12000-15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。如果回收的DNA用于盐敏感实验（如平末端连接或直接测序）,建议加入通用洗柱液后静置2-5分钟再离心。
8.12000-15000g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
9.将离心柱吸附置于一新的干净的塑料离心管（自备）中，悬空加入50uLDNA洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央。
核酸胶回收注意：如果回收的DNA用于测序，则可用重蒸水（自备）洗脱DNA。DNA洗脱液可以也用TE替代，但用水或TE替代DNA洗脱液3.0时，回收率可能稍有降低。
10.静置3分钟后12000-15000g离心1分钟。
11.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。如果将所得DNA溶液再次加回到离心吸附柱中，重复洗脱过程，将得到更多的DNA。
12.用电泳方法或测OD方法确定回收所得DNA的浓度，1OD260对应的浓度是50ug/mL（对双链DNA）或40ug/mL（对单链DNA），纯净DNA的OD260/OD280比值应该在1.8左右。
注意：OD读数跟pH相关，如果用自备的重蒸水洗脱，OD值会低于在DNA洗脱液3.0中测定的数字。
核酸胶回收二：PCR或其他酶反应回收
13.直接在PCR或其他酶反应管中加2倍体积的通用溶胶液，振荡10秒混匀。如果PCR反应中使用了石蜡，需要预先去除。
14.活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
15.在上柱前，在反应液和溶胶液的混合液中加入相当于反应体积1/2的IPA（对100uL的反应液，加50uL），快速振荡10秒混匀。
16.直接进入上面胶回收操作的第5步并进行后面的操作。
核酸胶回收注意事项
1.电泳回收DNA时，电泳缓冲液可以用TAE、TBE或者本公司的超快电泳液。回收效果为SuperBuffer-2最好，TAE次之，TBE最差。
2.通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。
3.琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系，即体积越大，越不利于回收，一次胶回收以使用100mg琼脂糖凝胶为宜。
4.如果在5-10分钟内凝胶溶化不完全，可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化，否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中，影响DNA的回收效率。
5.胶溶化后的液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。
6.洗脱DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。
7.增大DNA洗脱液使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。DNA洗脱液可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。
核酸胶回收疑难解答
Q：为何用硅胶膜吸附柱法回收TBE胶中的DNA效果不好？
A：因为TBE中的会跟硅胶表面的OH基团反应，而这些OH又是吸附DNA所必需的。
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文献和实验实验原理核酸分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键（主要是氢键）结合，从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在 DNA 与 DNA、RNA 与 RNA 或 RNA 与 DNA 的二条单链之间进行。由于 DNA 一般都以双链形式存在，因此在进行分子杂交时，应先将双链 DNA 分子解聚成为单链，这一过程称为变性，一般通过加热或提高 pH 值来实现。用分子
核苷酸单体聚合而成的生物大分子，是生物细胞最基本和最重要的成分。一般认为，生物进化即始于核酸，因为在所有生命物质中只有核酸能够自我复制。今天已知核酸是生物遗传信息的贮藏所和传递者。一种生物的蓝图就编码在其核酸分子中。核酸是1869年米歇尔（F.Miescher）在脓液的白细胞中发现的。他当时称之为核素。阿尔特曼（R.Altmann）于1889年认识其酸性后，定名为核酸。 分类和功能 核酸分为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）两大类。这两类核酸
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