DEAE纤维素DE-52

特别提示：包括DEAE纤维素DE-52在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DEAE纤维素DE-52
英文名称：Cellulose DE-52
产品货号：QN4114
产品规格：100g

DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。

填料特征：

别名	DEAE纤维素52 离子交换纤维素 DEAE纤维素DE52
CAS	9013-34-7
特点	载量大，分辨率好，使用方便。
性状	白色或淡黄色纤维结块状
基质	高度交联纤维素
配基	二乙基氨基乙基
配基密度	40μmol/ml
吸附载量	110mg HSA/ml
填料的颗粒大小	50μm
zuì大流速	100cm/h
pH范围	3-10，在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性	各种缓冲液及盐，醋酸等
物理稳定性	0.1M中性缓冲液中，120℃30min
保存温度	4℃

储存条件：4℃保存，有效期180天

使用方法：
1．色谱柱装填
① 所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体zuì好做脱气处理。填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可，如果不好溶胀，可适当加热。
② 在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
③ 此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于装柱子的流速。
④ 在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
2．蛋白的结合
样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3．蛋白的洗脱
这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比zuì好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品zuì好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。阶段洗脱容易放大，重复性好，如果洗脱条件好完全可以得到和线性梯度一样或者更好。采用什么方法完全根据自己需要。
4．再生清洗
① 用完之后用0.1M醋酸洗5个柱体积，然后用2M NaCl洗5个床体积，再用水洗至中性，然后用20%乙醇保存。
② 有机溶剂和水混合很容易产生气泡，为了避免这样情况，可以把配好的有机溶剂在室温放置过夜，再使用，这样可以避免气泡进柱子而导致柱子不能正常使用。

特别注意：
1．上样之前，样品至少用0.45微米膜过滤，尽量去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。
2．在使用过程中，不能使用强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。

除了DEAE纤维素DE-52,，我公司还供应以下相关产品：



名称：羧甲基纤维素钠(粘度300～800)
货号：QN3987
规格：25g

名称：CM-葡聚糖凝胶C-25
货号：QN3989
规格：25g|100g

名称：DEAE-葡聚糖凝胶A-25
货号：QN3990
规格：25g|100g|500g

名称：精氨酸-琼脂糖凝胶4B
货号：QN4056
规格：25ml
储存条件：常温

名称：DEAE纤维素DE-52
货号：QN4057
规格：100g
DEAE纤维素DE-52常用作柱色谱用吸附剂，分离提纯蛋白质、核酸、低相对分子质量蛋白质、酶、细胞碎片和细胞。
储存条件：室温干燥保存

名称：DEAE葡聚糖凝胶A-50
货号：QN4058
规格：25g
DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85-7.5)，其余均属酸性蛋白。在PH7.2-7.4的环境中，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分离获得纯化的IgG。

基质：Sephadex
颗粒大小：40～120μm
zuì大流速：45cm/h
工作pH：pH2.0～9.0
储存条件：室温

实验步骤：
1．预处理
称DEAE-Sephadex A-50(下称A-50)5克，悬于500ml蒸馏水，1小时后倾去上层细粒。按每克A-50加0.5M NaOH 15ml的比例，将A-50浸泡于0.5M NaOH中，搅匀，静置30分钟，装入布氏漏斗(垫有2层滤纸)中抽滤，并反复用蒸馏水抽洗至PH呈中性；再以0.5M HCl同上操作过程处理，zuì后以0.5M NaOH再处理一次。处理完后，将A-50浸泡于0.1M，PH 7.4 PB中过夜。
2．装柱
① 将层析柱垂直固定于滴定铁架上，柱底垫一园尼龙纱，出水口接一乳胶或塑料管并关闭开关。
② 将0.1M，PH7.4 PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入经预处理并以同上缓冲液调成稀糊状的A-50。待A-50凝胶沉降2～3cm厚时，启开出水口螺旋夹，控制流速1ml/分钟，同时连续倒入糊状A-50凝胶至所需高度。
③ 关闭出水口，待A-50凝胶完全沉降后，柱面放一园形滤纸片，以橡皮塞塞紧柱上口，通过插入橡皮塞之针头及所连接的乳胶或塑料管与洗脱液瓶相连接。
3．平衡
启开出水口螺旋夹，控制流速12-14滴/分钟，使约2倍床体积的洗脱液流出。并以PH计与电导仪分别测定洗脱液及流出液之PH值与离子强度是否相同。达到一致时关闭出水口，停止平衡。
4．加样及洗脱
启开上口橡皮塞及下口螺旋夹，使柱中液体缓慢滴出，当柱面液体与柱面相切时，立即关闭出水口，以毛细滴管沿柱壁加入样品(体积应<床体积的2％，蛋白浓度以＜100mg为宜)。松开出水口螺旋夹使柱面样品缓慢进入柱内，至与柱面相切时，立即关闭下口，以少量洗脱液洗柱壁2-3次；再放开出水口，使洗液进入床柱，随后立即于柱面上加入数ml洗脱液，紧塞柱上口，使整个洗脱过程成一密闭系统。并控制流速12～14滴／分钟。
5．收集
开始洗脱的同时就以试管进行收集。每管收集3～5ml。共收集10～15管。
6．测蛋白
以751-G型紫外分光光度计分别测定每管OD280nm，与OD260nm，按前述公式计算各管蛋白含量。并以OD280nm为纵座标，以试管编号为横座标，绘制洗脱曲线。
7．合并、浓缩
将洗脱峰的上坡段与下坡段各管收集液分别进行合并，以PEG(MW6000)洗缩至所需体积，加入0.02％NaN3防腐剂，于4℃保存备用。
8．A-50凝胶的再生
在柱上先以2M NaCl洗柱上的杂蛋白至流出液的OD280nm＜0.02，再以蒸馏水洗去柱中盐。然后按预处理过程将A-50再处理一遍即达再生。近期用时泡于洗脱缓冲液中４℃保存；近期不用时，以无*酒精洗2次，再置50℃温箱烘干，装瓶内保存。

注意事项：
1．柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就得获得理想的分辨率，但由于层析柱流速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低。柱的直径增加，使液体流动的不均匀性增加，分辨率明显下降。
2．纯化过程必须严格控制脱缓冲液的PH及离子强度。样品与A-50凝胶必须用洗脱缓冲液彻底平衡后，才能进行柱层析。
3．所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。
4．洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。
5．上样的体积要小，浓度不宜过高。
6．加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。