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文献和实验,共价闭合环状质粒DNA复性快,而线性的染色体DNA复性缓慢,经过离心与蛋白质和大分子RNA一起沉淀下去。 3.器材 超净工作台,接种环,酒精灯,台式离心机,旋涡混合器,微量移液取样器,1.5ml微量离心管,恒温摇床,摇菌试管,双面微量离心管架,试管架,标签纸,磁力搅拌器等。 4.试剂 Pinpoint™xa-3质粒载体菌,pBS-CHI载体菌,LB培养基1000ml(含100µg/ml氨苄青霉素),葡萄糖/Tris/EDTA(GTE)溶液(溶液 I),NaOH/SDS溶液(溶液 II
制成50% 悬液。 每 1mL 细胞裂解液上清加入 100 µL Agarose protein A+G 珠子,4℃ 振荡 10 min,进行预清除。 4℃,10000 rpm 离心10 min移去 Agarose protein A+G 珠子,转移上清至一新离心管中。 用 Bradford 法(考马斯亮蓝染色法)测定上清蛋白浓度。(应至少将细胞裂解液作 1:10 稀释后再测定,这是因为存在于裂解液中的去污剂成分会干扰考马斯亮蓝的作用)。 根据所测得的细胞裂解液蛋白浓度,用 PBS
(1992) The oligonucleotides we use are kits, contaning 20 decamers, from Operon Technologies Inc. . I. DNase I treatment of RNA mix and incubate for 30 min. at 37 °C : 50 µgRNA, 10 µl RNase inhibitor (1 U/µl), 1 µl
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