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- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Endotoxin Removal Kit
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
终点显色法内毒素定量试剂盒产品及特点：
细菌内毒素(脂多糖，LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中，发现细菌内毒素在其中起着关键的作用，内毒素使机体免疫功能严重受损，进一步的发展可能引发脓毒性休克，弥散性血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。因此，内毒素的清除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的，尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。本试剂盒使用的是一类高效内毒素清除树脂，它以修饰过的多粘菌素B（PMB）为配体，进行特异性的内毒素清除。经此专用亲和介质纯化，样品最终的内毒素水平可低于0.1EU/mL。本产品的主要特点如下：
1.高稳定性，高去除效率。
2.高结合力：>2,000,000EU/mL。
3.pH范围为5-10时，亲和介质对内毒素的清除率在92%以上；pH值在7-8时，清除效率最高。
4.无需恒流泵即可调节流速。
5.重复使用5次不会改变柱子效果。
6.使用方便，试剂盒中提供无热原缓冲液，无热原收集管及无热原枪头等。
7.适合纯化对象为蛋白，多肽，抗体，多糖等。
8.可耐受试剂：20%DMSO,20%乙醇,20%甘油;1M尿素,300mM咪唑;0.05%吐温-20,10mMDTT等。
终点显色法内毒素定量试剂盒运输及保存：
常温运输，4℃保存,有效期一年。
自备试剂：0.1M的和0.1M盐酸（用于调节样品pH，均可从本公司另购）
终点显色法内毒素定量试剂盒使用方法
1.样品处理：样品的pH值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。虽然结合内毒素的pH范围在6-9，但是7-8的pH范围是纯化的最佳范围。合适的离子浓度可以降低非特异性吸附，0.15-0.5MNaCl的条件可以得到一个很好的去除效率和低的样品损失。所以，纯化之前可以使用处理过的氯化钠，0.1M的或0.1M盐酸来调节离子强度或pH值。
2.活化亲和介质：将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除预装柱顶部的盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干，加入5mL的（预冷）再生缓冲液，调节流速控制器，保持流速在0.25mL/min（或者10滴/min），待再生缓冲液流干，再加入5mL再生缓冲液，再重复操作两次，确保体系保持无热原（即内毒素）存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要60分钟完成。
3.平衡亲和介质：活化完毕后，加入6mL的（预冷）平衡缓冲液，调节流速控制器，保持流速在0.5mL/min，流干平衡缓冲液，再按此操作重复两次。这步操作大约需要40分钟完成。
4.内毒素清除：将流速控制器关闭，使用无热原枪头将样品加入，打开控制器，控制流速不高于0.25mL/min，流出液体积达到1.5mL后，使用无热原接收管接受样品，样品流干后，再加入1.5mL-3.0mL的（预冷）平衡缓冲液淋洗，收集淋洗液。检测样品浓度及内毒素水平。
5.再次使用：如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱重新再生，按照步骤1重新再生，然后上样纯化。
6.保存条件：如果预装柱用完后需要保存，先用10mL平衡缓冲液平衡柱子，待平衡液流干，加入1.5mL的再生缓冲液（含0.02%的）。
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1.高稳定性，高去除效率。
2.高结合力：>2,000,000EU/mL。
3.pH范围为5-10时，亲和介质对内毒素的清除率在92%以上；pH值在7-8时，清除效率最高。
4.无需恒流泵即可调节流速。
5.重复使用5次不会改变柱子效果。
6.使用方便，试剂盒中提供无热原缓冲液，无热原收集管及无热原枪头等。
7.适合纯化对象为蛋白，多肽，抗体，多糖等。
8.可耐受试剂：20%DMSO,20%乙醇,20%甘油;1M尿素,300mM咪唑;0.05%吐温-20,10mMDTT等。
终点显色法内毒素定量试剂盒运输及保存：
常温运输，4℃保存,有效期一年。
自备试剂：0.1M的和0.1M盐酸（用于调节样品pH，均可从本公司另购）
终点显色法内毒素定量试剂盒使用方法
1.样品处理：样品的pH值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。虽然结合内毒素的pH范围在6-9，但是7-8的pH范围是纯化的最佳范围。合适的离子浓度可以降低非特异性吸附，0.15-0.5MNaCl的条件可以得到一个很好的去除效率和低的样品损失。所以，纯化之前可以使用处理过的氯化钠，0.1M的或0.1M盐酸来调节离子强度或pH值。
2.活化亲和介质：将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除预装柱顶部的盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干，加入5mL的（预冷）再生缓冲液，调节流速控制器，保持流速在0.25mL/min（或者10滴/min），待再生缓冲液流干，再加入5mL再生缓冲液，再重复操作两次，确保体系保持无热原（即内毒素）存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要60分钟完成。
3.平衡亲和介质：活化完毕后，加入6mL的（预冷）平衡缓冲液，调节流速控制器，保持流速在0.5mL/min，流干平衡缓冲液，再按此操作重复两次。这步操作大约需要40分钟完成。
4.内毒素清除：将流速控制器关闭，使用无热原枪头将样品加入，打开控制器，控制流速不高于0.25mL/min，流出液体积达到1.5mL后，使用无热原接收管接受样品，样品流干后，再加入1.5mL-3.0mL的（预冷）平衡缓冲液淋洗，收集淋洗液。检测样品浓度及内毒素水平。
5.再次使用：如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱重新再生，按照步骤1重新再生，然后上样纯化。
6.保存条件：如果预装柱用完后需要保存，先用10mL平衡缓冲液平衡柱子，待平衡液流干，加入1.5mL的再生缓冲液（含0.02%的）。
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文献和实验相关实验
)曾被认为是一种较好的方法，但由于其干粉试剂复溶后稳定性较差和液体双试剂期较短，使用上受到一定限制。以前我们检测二氧化碳采用酸碱滴定法中会使用到指示剂酚红，目前我们采用浙江伊利康公司提供的指示剂显色法测定二氧化碳试剂盒，就是在滴定法测定二氧化碳的基础上改良应用于日立7060全自动生化分析仪上测定，结果比较满意，现报道如下： 1 材料和方法 1．1材料 1.1.1试剂 伊利康公司提供得二氧化碳液体双试剂盒及配套得A、B标准液（批号：20030402，有效期：一年半）；北京
检测的正确性和准确性的第一步，下面简单介绍一下不同类型的样本的处理方法。 血清血清是最常用于ELISA检测的一类样本，处理也比较简单。用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。（最好将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃1000×g离心20min，仔细收集上清。建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA
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