基因克隆

客服电话：010-58717636 业务QQ1:807475538 业务QQ2：2625721894
市场部邮箱：biokitmarket@163.com


1.基因片段的载体克隆

服务概述

把外源基因片段与目标载体进行体外重组连接，再转化到大肠杆菌等宿主菌中，继而筛选含有目的基因片段的重组质粒的转化子，然后使此转化子大量扩繁并从中提取重组质粒DNA。

样品要求

a.目标基因序列（最好附原始测序报告）；

b.克隆模板（包括：菌液、质粒、PCR扩增产物、RT-PCR扩增产物、从其他质粒上酶切得到的DNA片段等）及检测结果和背景资料；

c.载体及其图谱（常用载体可由我方免费提供）；

d.注明克隆要求，克隆使用的酶切位点。

服务流程

载体构建流程为：酶切，凝胶回收，连接，转化，筛选，测序。

完成时间

2周内完成。

最终产品

a.构建好的重组质粒，不少于1μg；

b.含有重组质粒的菌株；

c.电泳图谱，测序图谱，酶切图。

2.目标基因（已知全序列）的克隆

服务概述

根据客户提出的目标基因的相关信息，设计并合成特异性引物，以基因组DNA或mRNA逆转录的cDNA为模板，PCR扩增目标基因片段，回收目标基因片段并与目标载体进行体外重组连接，再转化到大肠杆菌等宿主菌中，继而筛选含有目的基因片段的重组质粒的转化子，然后使此转化子大量扩繁并从中提取重组质粒DNA。

样品要求

a. 客户提出目标基因的中英文名称及相关该基因的信息
b. 材料要求新鲜，其中的RNA或基因组DNA无降解；样品量：组织（100~200mg），细胞（1X10 ⁸）。若客户提供核酸样品，基因组DNA最低为1~2μg（>30ng/μl），最低总RNA量为2~3μg（>300ng/μl）或最低mRNA量为0.2~0.3μg（>30ng/μl）。其余详见“文库构建”中的要求。

服务流程

抽提RNA并逆转录成cDNA，或抽提基因组DNA，设计并合成引物，PCR扩增，凝胶回收，TA克隆，测序鉴定，转化子扩繁及菌种保存。

完成时间

3~8周内完成。根据目标基因的长度、结构及mRNA的丰度等而异。

最终产品

a. 构建好的重组质粒，不少于1μg；

b. 保存于甘油中的含有重组质粒的菌株一份；
c. 实验报告（包括电泳图谱），引物及其序列，测序图谱（电子版碱基序列与AB1格式的彩色图谱），序列拼接与分析。

3. 目标基因（全合成）的克隆

服务概述

在已知基因全序列但采用一般实验手段无法得到目的基因片段时，可以进行实验室人工全合成。

服务流程

1. 我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列。根据序列的具体情况设计合成方案并通过业务员或技术员给您报价。
2. 在得到您认可后我们将立即进行单链Oligo DNA 合成、DNA 片段拼接等工作，然后把全长基因克隆于载体中，再通过DNA 测序确认合成基因的正确性。
3. 测序结果如果发现有错误位点，我们会采取定点突变方法进行修复，保证整个序列的正确性。
4. 提供实验结果。

完成时间

6~9周内完成。根据目标基因的长度、结构而异。

最终产品

a. 构建好的重组质粒，不少于1μg；
b. 含有重组质粒的菌株一份；
c. 实验报告（包括电泳图谱），引物及其序列，测序图谱（电子版碱基序列与AB1格式的彩色图谱），序列拼接与分析。

4.目标基因（仅知部分表达序列）的克隆

详见RACE技术服务。