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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0027
- 2026年01月30日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
PET RNAOUT
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料，但是由于它们的保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。
石蜡包埋组织RNAout本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包埋组织中快提RNA的试剂，具有下列特点：
1. 一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2. 含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
3. 能有效去除基因组 DNA 的污染，得到的RNA可直接用于 RT-PCR 反应。
4. 即开即用，客户自己不需要准备额外的试剂。
石蜡包埋组织RNAout运输及保存：
低温运输，4℃保存（溶液 C 需要-20℃放置），有效期一年。
石蜡包埋组织RNAout自备试剂：氯仿、75%乙醇。
石蜡包埋组织RNAout使用方法
1. 将 5 片厚度为 6-8 um 的石蜡包埋组织切片转移到 1.5 mL 塑料离心管(最好 使用螺旋盖离心管)中并加入 1 mL 溶液 A，在振荡器上以最大速度振荡 10 秒。
2. 加入 75 uL 溶液 B，在振荡器上以最大速度振荡 10 秒。
3. 7000×g 室温离心 2 分钟，溶液将形成两个相，其中组织切片位于下相。
4. 小心吸弃上层液体。
5. 将离心管放入真空抽干机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
6. 加入 150 uL 溶液 C，55℃保温过夜。
7. 短暂离心，95℃保温 10 分钟。
8. 加入 0.5 mL 溶液 D，充分震荡半分钟。
9. 加入 0.1 mL 自备氯仿，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
10. 13000-5000×g 室温离心 3-5 分钟。
11. 将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。下层有机 相（蓝色）和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢 进行，否则容易吸出交界面的不可见的 DNA。
12. 在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡 30 秒混匀。
13. 13000-15000 g 室温离心 5 分钟，离心底的侧面将形成 RNA 沉淀。如果需 要提高 RNA 回收率，可以将离心时间延长到 20 或 30 分钟。
14. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。
15. 在含 RNA 沉淀的离心管中加入 1mL 自备的 75%乙醇，振荡混匀 30 秒。
16. 13000-15000 g 室温离心 1 分钟。
17. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。
18. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约 50 uL)。注意不要吸弃沉淀。 此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
19. 室温放 1-2 分钟后立即加入 50-100 uL RNA 溶解液使 RNA 沉淀溶解。千万 不要用真空离心法使 RNA 沉淀过于干燥，否则 RNA 将变得十分难溶。样品立 即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA 完整性的电泳检测：
21. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检 测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/ 组织用量)。
22. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
石蜡包埋组织RNAout背景资料：甲醛固定组织细胞的分子机制--蛋白质部分
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文献和实验以下操作按照天根产品 DP331 石蜡包埋组织 DNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 石蜡切片或石蜡块2. 无水乙醇 二甲苯3. 移液器及配套无菌枪头（10 μl， 200 μl ，1ml），1.5 ml 离心管4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机实验准备-试剂盒准备：使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。本文版权归天根生化科技（北京）有限
以下操作按照天根产品 DP330 石蜡包埋组织 DNA 快速提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 石蜡切片或石蜡块2. 无水乙醇3. 移液器及配套无菌枪头（10 μl， 200 μl ，1ml），1.5 ml 离心管4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机实验准备-试剂盒准备：使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。本文版权归天根生化科技（北京）有限
近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原位杂交或原位PCR分析的分子生物学方法，是免疫细胞化学技术的重要延伸。通过对DNA
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