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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0014
- 2025年12月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Column Animal RNAOUT
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是动物总RNA快速提取试剂，动物RNAOUT的柱式升级产品，可用于从各种动物组织（包括白细胞）快速提取总RNA。
柱式动物RNAout跟动物RNAOUT相比其主要特点是：
1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280 一般在 2.0 左右。
3. 一般不含用 RT-PCR 可以检测到的基因组 DNA 污染。
4. 适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验
6. 性价比高于进口的柱式 RNA 提取产品。
7. 可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。
柱式动物RNAout运输及保存：
常温运输和保存，溶液 A 需要放 4℃长期保存，有效期一年。 自备试剂氯仿。
柱式动物RNAout使用方法：下面的操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用： a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每 10 平方厘米细胞中加入 1 mL 溶液 A， 用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组 DNA 充分断裂。 b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每 1-5×10 6悬浮细胞中加入 1 mL 溶液 A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组 DNA 充分断裂。如果是 fibroblasts 或 carcinoma cell，1 mL 溶液 A 的细胞 使用量不要超过 1×10 6个细胞。 c) 对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中，每 50-100 mg 组织加 1 mL 溶液 A，用 Polytron 剪切式匀浆器匀浆 30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的 组织（细胞中含大量正在复制的 DNA），建议组织的使用量不要超过 50 mg/ mL 溶液 A，否则十分容易产生 DNA 污染。也可以用液氮研磨：在 研钵中加入液氮，再加入 50-100mg 新鲜组织，然后研磨成粉后转移到 1.5mL 离心管中，再加入 1mL 溶液 A，震荡 30 秒混匀。 d) 对 RNALOCKER 保存组织：先用纸吸去 RNALOCKER 液体后再剪切成小块， 其余操作同新鲜组织的处理。
2. 如果进行无氯仿操作（所得 RNA 纯度稍低，但一般不影响后续使用），则 将上步所得的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管 中，12,000 rpm 室温离心 3-5 分钟。
3. 如果进行带氯仿操作（所得 RNA 纯度比免氯仿操作稍高），则将上步所得 的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加 入 0.2 倍体积的自备氯仿(1 mL 溶液 A 需 0.2 ml 氯仿)，振荡器上充分振 荡混均 30 秒，12,000 rpm 室温离心 3-5 分钟。
4. 将上清液转移到一个干净的 2 mL 塑料离心管中。注意：无氯仿操作时， 离心后管底是细胞碎片和结缔组织纤维。带氯仿操作时，离心后分上下层， 下层有机相和上下层中间含有 DNA 和蛋白质，吸取上清时避免触及，否 则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 100 uL 上清液不 取。同时吸取上清时最好缓慢进行。
5. 加入等体积的溶液 B，充分颠倒混匀。
6. 分次（一般需要 2-3 次）将加入溶液 B 后的混合液转移到离心吸附柱中， 12,000 rpm 室温离心半分钟，弃穿透液。如果溶液粘稠，可以延长离心 时间到 2 分钟。
7. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟， 弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
8. 再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟， 弃穿透液。此步可以省略。
9. 再室温 12,000 rmp 干甩半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液 会影响 RNA 的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free1.5mL 塑料离心管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱液。
11. 室温 12,000 rmp 离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即 使用或存放于-80℃待用。
12. RNA 的电泳检测：本试剂盒提取的 RNA 最好用甲醛变性胶电泳，如果在 非变性的普通琼脂糖胶（in TAE 或 TBE buffer）上电泳，一定要使用 RNA 专用上样液 RNAon（操作详见 RNAon 使用手册），千万不要使用 常用的 DNA 上样液，因为 DNA 上样液没有经过去 RNase 处理，也不能 将 RNA 变性，得到的带型将十分杂乱。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子 （BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。
15. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。
柱式动物RNAout疑难解答
Q：上样孔里的红色荧光物一定是 DNA 污染吗？
A：不是。用 TAE 或 TBE 电泳液和非变性胶电泳 RNA 时容易产生此现象。xuanya初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过络合（如果使用 TBE 作电泳液的话）形成的复合物，加 RNase 处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和 RNA 专用上样液(如本公司的 RNAon)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA 污染，可以用 RNase 处理 RNA 样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA 污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用本公司的非酶的 DNA 去除剂 DNA Erasol 或 RNase-free DNase，由于 RNase-free DNase 一 般都有残留的 RNase 污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
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文献和实验在 RIPA 不可溶组分中，如果样品又是研磨困难的组织样品，则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上（内质网，高尔基体，溶酶体，线粒体，内体等）表达，且蛋白表达量较低，若用总蛋白检测时条带较弱，则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测，提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程，推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离，将样品分离为不同组分如分成细胞核，细胞浆，细胞
2.1 总RNA 提取 ………………………………………… 2.2 RT-PCR……………………………………………… 2.3 琼脂糖凝胶电泳…………………………………… 材料与方法 1. 材料 1.1 供试用动物组织/ 细胞 1.2 主要仪器设备 1.5ml 离心管、0.2ml PCR 管、高速离心机、5~10ul 加样器、2~20ul 加样器、20~200ul 加样器、TAKARA PCR 仪、551 可见光透射
2, 其它稳定剂和增强剂 三DNA提取相关产品 1.柱式小量质粒DNA抽提纯化试剂盒：MTL001-1 50次 79元 2.DNA胶回收试剂盒： MTL002-1 50次 89元 3.动物DNAout（动物DNA提取试剂盒）：3670-10 10 ml 90元 4.植物DNAout（植物DNA提取试剂盒）：3672-10 10次 90元 5.血液DNAout(血液DNA提取试剂盒)： 3671-10 10 次 90元 6.革氏阴性细菌DNAout提取试剂盒： 3673-10 10 次 90元
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