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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0013
- 2025年12月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Animal RNAOUT
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是类似于TRIzol、基于Guanidine thiocyanate/酚/氯仿提取原理的快速总RNA 提取试剂，可用于从各种动物组织（包括白细胞）和部分植物材料中快速提取总RNA。
1. 操作简单快速，只要 10 分钟左右，可以全在室温下进行。
2. RNA 质量高，OD260/OD280 一般在 1.9 左右。一般不含用 RT-PCR 可以检测到的基因组 DNA 污染。
3. 适用于大部分实验材料，如培养细胞、各种动物材料和少数植物材料。植物 RNA的提取最好使用苯公司的植物 RNAOUT。
4. 性价比高于进口 TRIzol 和 TRI Reagent 等同类产品。
动物RNAout(TRIzol) 运输及保存：
常温运输，4℃保存，有效期一年。 自备试剂 氯仿、IPA、75%乙醇、RNase-free 水。
动物RNAout(TRIzol) 使用方法
注意：下面的操作步骤是用 1 mL 本产品进行的微量提取的，细胞使用量一定 要准确，不能超过下述用量，否则将超出本产品的裂解能力，RNA 产量将急 剧降低。如果样品量大，请按比例增加各成份的用量。RNA工作环境最好用高效无毒的固相RNase清除剂彻底处理。
1. 对贴壁细胞（10 平方厘米）：吸尽培养液，加入 1 mL 的本产品用枪充分 吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管 中，进入第 6 步。
2. 对悬浮细胞（五百万至一千万个）：离心收集细胞，吸尽液体，加入 1 mL 本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的 1.5 mL 塑料离心管中，进入第 6 步。
3. 对新鲜组织（50-100 mg）：将新鲜组织剪切成小块，放入 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中，加入 1 mL 的本产品，用 Polytron 剪切式匀浆器冰上 匀浆 30 秒左右，将匀浆液转移至新的 1.5 mL 塑料离心管中，进入第 6 步。注意：对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量 正在复制的 DNA），使用量不要超过 30-50 mg，否则十分容易产生 DNA 污染。对 10 mg 以下的组织，最好加入本公司的微量 RNA 助沉剂。
4. 对 RNALOCKER 保存的组织（50-100 mg）：先用纸吸去 RNALOCKER 液体后 再剪切成小块，其余操作同第 3 步。RNALOCKER 处理后的组织韧性很强， 匀浆时间需要适当延长。
5. 对液氮中保存的组织（50-100 mg）：在研钵中研磨成粉，加入 1 mL 本 产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的 1.5 mL 塑料离心管中，进入第 6 步。
6. 在装有裂解物/匀浆物的 1.5 mL 塑料离心管中加入 0.2 mL 自备氯仿， 振荡器上充分振荡混均 30 秒。注意：一定要把官底的溶液震荡起来，否 则只是液面的振动。
7. 13000-15000 g 室温离心 3 分钟。
8. 将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。下层 有机相（蓝色）和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋 白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 50-100 uL 上清液不取。
9. 对脂类丰富的组织（如脂肪组织和脑组织），需再重复氯仿抽提一到两次 以让氯仿充分去除脂类分子。
10. 在上清液中加入等体积的IPA，振荡器上振荡 30 秒混匀。
11. 13000-15000 g 室温离心 5 分钟，离心底的侧面将形成 RNA 沉淀。如 果组织使用量低于 10 mg 或需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长 到 20 或 30 分钟。
12. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
13. 在含 RNA 沉淀的离心管中加入 1mL 75%乙醇，振荡混匀 30 秒。
14. 13000-15000 g 室温离心 1 分钟。
15. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
16. 重复第 13-15 的洗涤步骤一次（也可以省略）。
17. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50 uL)。注意不要吸弃RNA沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的后续使用。
18. 室温放1-2分钟后立即加入50-100 uL RNase-free 水使RNA沉淀溶解。 千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难 溶。RNA样品可以立即使用或存放于-80℃待用。 注意：由于RNase-free水没有主动灭活残留 RNase 的功能，而任何方法提取的RNA都可能有残留的 RNase，所以强烈建议客户使用本公司推出的具有主动灭活残留RNase功能的、同时跟后续RT-PCR等反应兼容的液相RNase清除剂。
动物RNAout(TRIzol) 附一：RNA 完整性的电泳检测（仅供参考，本产品不含相关试剂） 如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电 泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414， 2000）。如果是简单检测，可以使用TAE缓冲液或超快核酸电泳液进行常规电泳 ， 但文献报道必须使用RNAon 这样的变性上样液 （BioTechniques，9：558，1990）。普通DNA上样液不含变性剂， 也没经过去RNase处理，所以最好不要使用，否则RNA容易降解。 动物RNA电泳后应该在 UV 下呈现三条清晰的rRNA带，28S rRNA 条 带的荧光强度一般比 18S rRNA 条带的荧光强度强 1.5-2.3 倍。如果这 两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解（因为大的RNA被酶降解的可能更大）。 跟动物一样，植物果实和种子的 RNA 一般有三条电泳带，但植物叶片的 RNA 有四条或更多 rRNA 带，多余的RNA来源于叶绿体。 如果电泳发现 RNA 样品中有DNA 污染（一般是使用过多样品造成），可分别用本公司的非酶DNA清除剂或RNase-free DNase清除。
动物RNAout(TRIzol) 附二：RNA产量和纯度测定（仅供参考，本产品不含相关试剂） 用 pH 在 7.5-8.2 的 TE 缓冲液将 5-10 μL RNA 稀释 10-20 倍后在 OD260 和 OD260 测光吸收，通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。RNA的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而 不同，一般来说，代谢旺盛的组织(如肝脏和肾脏)RNA 的产率高，代谢不 旺盛的组织(如肌肉和脂肪组织)RNA 的产率低，下面是常见动物组织的 RNA 产率: 肌肉，胎盘和脑组织:1-2 μg RNA/mg 组织 肝，胰和肾组织: 5-10 μg RNA/mg 组织 培养细胞: 5-15 μg/10E6 细胞RNA的纯度通过 OD260/OD280 来确定，一般在 1.8-2.1 之间即算合格。但即使低于此范围，一般也不会影响 RT-PCR 等反应。 蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，多糖污染可以用本公司的多糖清除剂去除。
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文献和实验在收集到生物材料之后，最好能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。1. 提取组织RNA时，每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解：提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞；2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中，在试问
组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。 b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积（即3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。 c.细胞悬液离心收集细胞，每5～10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1mlTRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解
实验目的：掌握由动物组织中提取总RNA的方法 实验原理：Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA则分布在上层的水相中，最后用异丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗涤沉淀，这样就可以得到比较纯净的总RNA. 实验步骤： ① 先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～
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