γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒(微量法)

特别提示：包括γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒(微量法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒(微量法)
产品货号：SK030-1
产品规格：100管/96样

测定意义:
GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。

测定原理：
在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷毫摩尔数，即可计算出GCL活性。

实验中所需仪器及设备：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1ml比色皿、双蒸水。

除了γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒(微量法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：总一氧*氮检测试剂盒(硝酸盐/亚硝酸盐检测试剂盒)
货号：YT287
规格：50次|200次
本试剂盒采用了硝酸盐还原酶还原硝酸盐为亚硝酸盐，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧*氮。一氧*氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐和亚硝酸盐，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧*氮的量。

试剂盒组分：
样品稀释液————————15ml
NADPH——————————5mg
FAD———————————550μl
Nitrate Reductase————250μl
LDH Buffer————————550μl
LDH———————————500μl
NaNO2(1M)————————1ml
Griess Reagent I—————3ml
Griess Reagent II————3ml

本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶。高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用LDH清除NADPH。本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。

本试剂盒特点：
1. 对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
2. 样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧*氮的含量。酚红和10%血清对测定无明显干扰。
3. 样品需要量少。根据样品中一氧*氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
4. 检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。

本试剂盒采用了间接的一氧*氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧*氮水平，可以采用百奥莱博的DAF-FM DA(NO荧光探针)(YT285)。

注意事项：
1. RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。必需使用RPMI 1640培养液时，在检测一氧*氮前必需先换成其他适当培养液例如DMEM、MEM、F12等，或换成HBSS或PBS等。
2. 推荐选购百奥莱博的细胞与组织裂解液(一氧*氮检测用)(YT045)用于细胞或组织样品的裂解。也以自行选择适当方式制备细胞或组织样品的裂解液用于总一氧*氮的检测，但需注意自行选择的方式可能会干扰试剂盒检测时的酶反应而影响检测效果。检测细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液中的总一氧*氮含量时，不需要选购YT045。YT045裂解获得的样品还可以用于蛋白浓度的检测以及Western印迹检测，但需注意YT045中不含蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂。
3. 检测反应必须避光进行。
4. 由于检测过程中有还原反应，凡是影响还原反应的氧化或还原试剂要注意避免，例如常用的还原剂DTT和巯基乙醇。

储存条件：-20℃避光，有效期12个月。