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北京百奥莱博科技有限公司
200U
特别提示:包括UDG酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
加入物 | 加入量 |
2×Taq MasterMix | 25μl |
500bp模板(含UTP) | 1ng |
500bp扩增引物对 | 终浓度0.2μM |
250bp模板(无UTP掺入) | 1ng |
250bp扩增引物对2 | 终浓度0.2μM |
dH2O | 至50μl |
50℃ | 2分钟(降解含UTP的 污染模板) |
94℃ | 4分钟(灭活UDG酶) |
30次循环 | 94℃,30秒 57℃,30秒 72℃,30秒 |
72℃ | 5分钟 |
4℃ | 保温 |
加入物 | 加入量 |
5×Taq Buffer with Mg2+ | 10μl |
上游引物 | 0.2-1.0μM (终浓度) |
下游引物 | 0.2-1.0μM (终浓度) |
dATP, dGTP, dCTP | 各0.2mM(终浓度) |
dTTP | 0.1mM(终浓度) |
dUTP | 0.2mM(终浓度) |
如全部使用dUTP替代dTTP | 0.4mM(终浓度) |
模板 | 1-50ng(质粒) |
10ng-1μg(基因组) | |
Taq | 0.25μl(1.25U ) |
ddH2O | 至50μl |
UDG酶 | 0.2U,如残余污染严重可适量增加酶用量 |
组份 | WE0151-5ml | WE0152-5ml | WE0153-5ml |
2×Fast TaqMan Mixture | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
50×Low ROX | - | 200μl | - |
50×High ROX | - | - | 200μl |
ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX) | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Probe,10μM | 1μl | 0.2μM |
Template DNA | 2μl | |
50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
ddH2O | up to 50μl |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 30 s | |
变性 | 95℃ | 5 s | 35-40 个循环 |
退火/延伸 | 60℃ | 30 s |
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