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文献和实验，则需要V0+Vi体积的洗脱液，才能将它们由一端洗脱到另一端。中等分子(分子大小在上述两种极限之间)所需洗脱液体积介于两者之间，Ve=V0+KdVi(0 Kd为分配系数，它表示一种物质在孔隙内的滲透程度，相当于这种物质在孔隙内所占体积和孔隙总体积的比值。 如果假定蛋白质分子近于球形，同时没有显著的水合作用，则不同大小分子 量的蛋白质，进入凝胶筛孔的程度不同，其洗脱体积决定于分子大小。当蛋白质分子量在10000～15000时，蛋白质在葡聚糖凝胶柱上层析的洗脱
得水值 溶胀最少平衡时间（h） 柱头压力（kpa）(2.5cm直径柱) 肽及球形蛋白质 葡聚糖（线性分子） 室温 沸水
之间沿较短流程向下流动，受到的阻滞作用小，移动速度快，先出层析柱（此现象叫作被排阻。被排阻的最小分子量称为该规格凝胶的排阻极限）；而颗粒小于网眼的分子可渗入凝胶网眼之中，它们被洗脱时不断地从一个网眼穿到另一个网眼，逐层扩散，阻滞作用大，流程长，移动速度慢，因而后出层析柱。在层析柱的出口处，我们用多个试管分步收集洗脱液，就可将混合物中各组分彼此分离。 当我们从生物组织中用盐析法提取蛋白质后，常需要进行蛋白质的脱盐工作，我们可采用层析介质为葡聚糖凝胶G-25（或G-15、G-50
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