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文献和实验DNA 5~15分钟,用8mM NaOH溶解DNA。从50~70mg组织或107细胞中分离的DNA溶于300~600μl 8mM NaOH,DNA的浓度通常为0.2~0.3μg/μl。提取的DNA沉淀不易溶于水和Tris缓冲液中,建议用弱碱溶解,8mMNaOH的pH值为9,溶解DNA后可用TE,HEPES调节pH。从某些样品(尤其是组织)中提取的DNA中可能包含一些胶状不溶物可>12000×g离心10分钟除去。 DNA的定量:取一份溶于8mMNaOH的DNA加水测A260值。一单位A260值相当
真菌( 100mg),动物细胞(5×106~1×107),酵母(1×107) 。 TRIZOL试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂 糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带,(mRNA和hnRNA成分)两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S),低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值&ge
-20℃保存。使用前按照步骤A12~A13 操作溶解RNA。 A12.加50~200μl Buffer TE 充分溶解RNA 沉淀,4℃,≥12000×g 离心2min。 可根据RNA沉积块大小和RNA 使用浓度来决定Buffer TE 的体积。 A13.将上清转移到RNase-free的离心管,置-20℃以下保存。 [B.纯化基因组DNA] B8.在分离到的相间沉淀中加0.4ml 65℃预热的Buffer G-A,用1ml Tip 头快速吹打10次或旋涡振荡15sec,65℃温育5min
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