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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
185
- 英文名:
Agarose(Low EEO)
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
50g
特别提示:包括低电渗琼脂糖(无蛋白酶/核酸酶活性)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:低电渗琼脂糖(无蛋白酶/核酸酶活性)
英文名称:Agarose(Low EEO)
产品货号:WH0223
产品规格:50g
凝胶强度(1.5% Gel):>1200g/cm2
凝胶温度:87-89℃
融胶温度:87-89℃
核酸酶/蛋白酶活性:未检测到
除了低电渗琼脂糖(无蛋白酶/核酸酶活性),,我公司还供应以下相关产品:
名称:超级电泳液
货号:BTN151103
规格:100mL
本品是我司开发的超级核酸电泳液套装,其中的溶液A含抗水解的核酸染料,用于配制琼脂糖凝胶(溶液A也可用于电泳,但不经济);溶液B为不含染料的电泳液。
产品特点:
1.高浓度,溶液A和溶液B用去离子水稀释100倍后可以直接用作配胶工作液和电泳工作液,100mL的产品可以配制10 L工作液。
2.低产热,用溶液A配制的胶在溶液B配制的电泳液中电泳时可用30 V/cm的中等电压(cm是指电泳槽两电级之间的距离),一般的mini胶电泳(如检查PCR扩增)只需要5-10分钟即可完成,比TAE和TBE快4-5倍(TAE和TBE电泳一般需要40分钟)。当然,也可以按常规的电泳参数电泳,所需时间约为40分钟左右。
3. 用本产品溶液A 配制的琼脂糖凝胶可以在TBE和TAE缓冲液中低压电泳。用TBE 配制的琼脂糖凝胶也可以在本产品溶液B配制的电泳液中电泳(低压中压均可)。但用TAE 配制的胶不能在溶液B中电泳。
4. 用本产品电泳得到的DNA片段的胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收,不影响后续的DNA胶回收和DNA连接等反应。
5.溶液A(配胶用)和溶液B(电泳用)均可以单独购买。
产品组成:
| 成分 | A型 | B型 |
| 溶液A(配胶液,含染料) | 100ml | - |
| 溶液B(电泳液,不含染料) | - | 100ml |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件:常温保存和运输,有效期两年。如果本产品有沉淀析出现象,请65℃水浴溶解后使用。
使用方法:
将本品溶液A用去离子水稀释100倍(1mL溶液A加99mL去离子水),混匀后直接用于配琼脂糖胶,溶液B用去离子水稀释100倍(1mL本产品加99mL去离子水)后直接用于做电泳液,其余操作跟TAE,TBE缓冲液一样。需注意的地方是:
1.电压:对一般minigel,一般可以用250-350V 跑5-10分钟;对大的电泳槽,可用400-450V 跑5-10分钟。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。若继续存在,可能需要更换新的缓冲液。
2. DNA条带扭曲:DNA样品中所含SDS量过高时(SDS 主要来于上样液),DNA条带将出现扭曲,影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液,zuì好使用跟我公司超级电泳液兼容的上样液。
3. 反复使用:本溶液A配制的电泳液至少可以重复使用2-3次,如果使用大电泳槽,可以重复使用的次数会更多。
4. TBE胶:已经用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶,如果不含EB,SYBR Green等染料,则可以直接放入本产品溶液A配制的电泳液中按上述电泳条件电泳(因为溶液A含染料,故不需要额外再加染料)。如果用TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶含EB、SYBR Green或绿如蓝等核酸染料,则可以直接在本产品溶液B配制的电泳液中进行电泳。
5.溶液A配制的胶在TAE或TBE电泳液中电泳:已经用本产品溶液A配置好的琼脂糖凝胶,也可以直接在TBE或TAE电泳液中电泳,电压跟常规TAE或TBE电泳一样。
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文献和实验体积的 0.5 M EDTA,以终止消化。然后用等体积酚抽提、等体积氯仿抽提,2.5 倍体积乙醇沉淀,少量 TE 溶解(参见 DNA 提取方法,但离心转速要提高到 12000 g,以防止小片段 DNA 的丢失)。如果需要两种酶消化 DNA,而两种酶的反应条件可以一致,则两种酶可同时进行消化;如果反应条件不一致,则先用需要低离子强度的酶消化,然后补加盐类等物质调高反应体系的离子强度,再加第二种酶进行消化。三、 基因组 DNA 消化产物的琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是目前分离核酸片段最常用的方法,制备
,反应时间在1小时,而反应的终止则由EDTA 溶液的加入完成,因为它能鳌合核酸酶活性所必需的金属离子。 2、DNA的琼脂糖电泳 DNA的电泳有琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳,它们是分离、鉴定和纯化DNA片段的标准方法。 DNA的电泳原理与蛋白质的电泳原理基本相同。DNA分子在电场中通过凝胶介质中而泳动,除电荷效应外,凝胶介质还有分子筛效应,与分子大小及构象有关。由于DNA分子或DNA片段的分子量差别,电泳后呈现迁移位置的差异。琼脂糖凝胶电泳所需样品量仅0.5~1ug
分钟以延伸引物。 反转录酶的热稳定性各不相同,而热稳定性决定了每种酶的最佳聚合温度。使用热稳定的反转录酶,可达到更高的反应温度(如 50 ℃),有助于高GC或具有复杂二级结构 RNA 的变性,同时不影响酶活性(图 7)。 聚合时间取决于反转录酶的持续合成能力,即单次合成过程中掺入的核苷酸数量。例如,持续合成能力较低的野生型 MMLV 反转录酶通常需要 60 多分钟才能完成 cDNA 合成。相比之下,持续合成能力较高的改良型反转录酶可能只需要 10 分钟时间,就可以合成 9 kb cDNA
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