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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Genetically modified soybean EPSPS gene nucleic acid detection kit (PCR-fluorescence probe method)
- 库存：
850
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
48T/50T
通用名称：转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
【包装规格】48T/盒
Name ：Genetically modified soybean EPSPS gene nucleic acid detection kit (PCR-fluorescence probe method)
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【检验原理】
本试剂盒采对指标基因设计特异性的引物和探针，用荧光 PCR 技术对指标的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【预期用途】
本试剂盒适用于检测动物腺、肝、脾、肺组织及人痰、血液等标本中分离出的指标，用于指标的定量检测辅助诊断。
【试剂组成】
| 名 称 | 规 格 |
| 核酸提取液 | 1.5mL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| 反应液 | 1.0mL×1 管 |
| 阳性质控品 | 50μL×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL×1 管 |
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本
运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
组织样品：称取组织样品约 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，匀浆后取 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；
痰、尿液等液体样品：取 100μL 于灭菌离心管中；
血液样品：取抗凝血下层血细胞 50μL，加入 100μL 双蒸水吹匀。
DNA 提取
对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000
rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒
（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【使用方法】
样品处理（样本处理区）
样本前处理
组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子取 100μL 进行提取。
【标本采集】
病死或扑杀猪，无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品；生猪灭菌
棉拭子沾取气管分泌物，放入无菌试管中
【标本采集】
病死或扑杀猪，取分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等
试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
| 试剂 | 反应液 | 酶液 |
| 用量（样本数为 N） | 20μL | 1μL |
加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
PCR 扩增（核酸扩增区）
将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；
荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）
NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。
质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【参考文献】
国家质量监督检验检疫总局.SN/T 1280-2003 国境口岸鼠疫检验规程[S].北京:科学出版社, 2003.
张志凯, 海荣, 蔡虹, 等. 鼠疫耶尔森菌的多重 PCR 检测方法[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2007.
吉林省质量技术监督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶尔森菌核酸的测定-荧光PCR 方法[S].
推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
患病动物：腺、肝、脾、肺组织、粪便、血液人：痰；尿液、血液
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【产品图片】
【生产企业】
企业名称：上海烜雅生物科技有限公司
生产地址：金海公路3265号14幢11546室
上海烜雅生物科技有限公司生产的转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)供应质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。
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本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。
转基因大豆EPSPS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)热销产品：
| 一站式 PCR-SSCP 套装 | XY-TE-0010 | 1套 |
| 甲酰胺，PCR 级 | XY-TE-0074 | 5mL |
| PCR 优化试剂盒 | XY-TE-0078 | 1套 |
| 甲基化专一性 PCR 试剂盒 | XY-TE-0119 | 50 次 |
| RAPD PCR 试剂盒 ( 含银染 ) | XY-TE-0142 | 100 次 |
| 即用型易错 PCR 试剂盒 | XY-TE-0143 | 100 次 |
| 即用型荧光定量 RT-PCR 试剂盒 | XY-TE-0185 | 300 次 |
| 即用型荧光定量 RT-PCR 试剂盒 | XY-TE-0186 | 50 次 |
| 即用型 PCR 检测试剂盒系列 | XY-TE-0193 | 50T |
| DOP-PCR 试剂盒 | XY-TE-0204 | 50 次 |
| PCR 专用 LIC 克隆套装 | XY-TE-0231 | 1μg |
| MnCl2溶液，25mM，PCR 级 | XY-TE-0493 | 5mL |
| 克必隆 eTS PCR 法 cDNA 合成试剂盒 | XY-TE-0497 | 10 次 |
| 克必隆 eTS 超敏 PCR 法 cDNA 合成试剂盒 | XY-TE-0498 | 10 次 |
| 克必隆 eTS 抑制性差减杂交 PCR 试剂盒 | XY-TE-0501 | 10 次 |
| 克必隆 eTS PCR 产物差减杂交试剂盒 | XY-TE-0502 | 1套 |
| 克必隆 eTS miRNA RT-PCR 试剂盒 | XY-TE-0508 | 10 次 |
| 天净沙甲基化 PCR 2.0 试剂盒 | XY-TE-0523 | 150 次 |
| 海藻糖溶液，1.5M，PCR 级 | XY-TE-0532 | 1.5mL |
| 即用型多重 PCR 试剂盒 | XY-TE-0632 | 50 次 |
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文献和实验大多是采用琼脂糖凝胶电泳法，首先检测CAMV-35S启动子和NOS终止子进行筛选，然后检测EPSPS抗草甘膦基因，操作烦琐、费时。本研究利用双重PCR技术同时扩增上述基因片段，用激光诱导荧光-毛细管电泳高效、快速检测PCR产物，显著提高了检测效率，并使灵敏度大为增加。本方法所需样品量少（nl级），快速、灵敏和准确，已成功用于实际转基因大豆样品的分析。1 材料和方法1．1 仪器与试剂毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置（自行组装），其中氦氖激光器（543.5nm，JDS Uniphase，USA）参数
一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法
为探针进行杂交，所得X光片成像结果如图2右侧所示。成像斑点清晰，三张重复膜的结果一致，被检转基因植株全为阳性，阴性对照处未检出杂交信号，阳性对照明显。 3、讨论 PCR的方法用于检测转基因植物非常简便，但是其高灵敏度的特点容易导致假阳性结果，须经PCR产物克隆测序最终确认，如果用于鉴定大批量的转基因植物将会相当的费时费力。为此我们借助芯片点样仪样品量少、操作方便、重复性好等优点，采用快速、安全的生物素标记探针杂交法对转基因植物的PCR产物进行鉴定。为保证结果的真实性，一方面将PCR
PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能
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