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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Fusarium oxysporumPCR()
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
详见说明书
点击了解更多PCR检测试剂盒。
| 产品名称 | 尖孢镰刀菌PCR检测试剂盒植物病原说明书 |
| 英文名称 | Fusarium oxysporumPCR() |
| 编号 | FS-R1506 |
尖孢镰刀菌PCR检测试剂盒植物病原说明书清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀释液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
产品说明书 1份
注意事项
1．尖孢镰刀菌PCR检测试剂盒植物病原说明书基础程序；
2．扩增温度和延伸温度；
3．反应时间；
4．循环次数；
5．PCR 反应液的配制；
6．PCR技术的基本原理；
7．PCR的反应动力学；
8．PCR扩增产物；
9．PCR反应体系与反应条件。
反应五要素
尖孢镰刀菌PCR检测试剂盒植物病原说明书参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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钙黄绿素 Calcein 订购|咨询
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5-FAM ；5-羧基荧光素 5-Carboxyfluorescein 订购|咨询
黑色素(水溶) Nigrosine water soluble 订购|咨询
技术特点：
1尖孢镰刀菌PCR检测试剂盒植物病原说明书准确可靠，临床双盲对照试验＞1000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。
2高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速：整个检测流程只需3小时。
4简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。
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文献和实验影响汁液的获取量，不过我们还没有发现能够影响汁液获取量的特定条件究竟是什么。从染病的植物中只能得到较少量的汁液。如被维管萎蔫病真菌（尖孢镰刀菌）侵染了的植物。 ( 3 ) 蛋白质或糖分的浓度可以被用于测量被韧皮部污染的程度；若木质部中两种物质浓度低，说明木质部汁液纯度高。 ( 4 ) 多聚和寡聚糖可以和普通试剂反应来测量蛋白质浓度，像考马斯亮蓝和二喹啉甲酸（BCA，Sigma) 。它们在木质部汁液中会导致对蛋白质含量估算偏髙。 ( 5 ) 活体植株中，筛管分子膨压为正，导管分子内膨压
1. RNA提取 在以上两种RT引物中，Ologod（T）特异引物所需要的RNA尽量是用特殊试剂盒提取的小RNA，而茎环状结构RT引物需要RNA正常提取就好。 另外由于所需样本不同RNA提取方法也不完全相同，普通组织样本和细胞可以研磨用Trizol+氯仿抽提；血液和植物样本需要前期处理后再用Trizol+氯仿或用专门的Kit抽提。 2. 反转录 确认用Oligod（T）特异RT引物时，RNA需要进行3'Poly（A）加尾处理。 反转录的酶没有特殊要求，操作请按照各自反转录酶的说明书
烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分析扩增的DNA片段。 表22-2 电泳检测扩增结果，EB荧光显色（254nm） [NextPage] 第四节 影响PCR的主要因素 PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致。现将几种主要影响因素介绍
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