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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
55
- 英文名:
Fonsecaea spp.PCR
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海抚生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
详见说明书
点击了解更多PCR检测试剂盒。
| 产品名称 | 着色霉PCR检测试剂盒图片 |
| 英文名称 | Fonsecaea spp.PCR |
| 编号 | FS-R1487 |
着色霉PCR检测试剂盒图片清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
注意事项
1.着色霉PCR检测试剂盒图片基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素
着色霉PCR检测试剂盒图片参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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技术特点:
1着色霉PCR检测试剂盒图片准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
2高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速:整个检测流程只需3小时。
4简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。
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。 图 1. 富集质膜组分后检测跨膜蛋白更易检出:目的蛋白 SGL1 是跨膜蛋白,使用总膜蛋白检测困难,使用柱式法质膜及细胞组分分离试剂盒富集质膜后再检测质膜组分,可以显著提高 SGL1 的检出效率。 (图片来源:Kashiwagi Y,2015,PLoS ONE 10(6):e0130605. doi:10.1371/journal.pone.0130605.) (3)有条件诱导目的蛋白表达 如果通过增溶目的蛋白或分离亚细胞结构富集目的蛋白,仍无法得到 WB 条带,可通过查阅相关
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