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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 样本：
线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒
- 库存：
23
- 标记物：
详见说明书
- 适应物种：
详见说明书
- 应用：
检测法
- 检测方法：
差速离心法
- 检测范围：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 规格：
50管/48样
产品介绍：
产品名称：线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒50管/48样费用
规格：50管/48样
测试方法：差速离心法
测定意义：线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此，准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。
注意事项：
①线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒50管/48样费用加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
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胰蛋白酶（猪胰）/Trypsin(porcine pancreas);BR；1：250;25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;CAS:
脂肪酶（猪胰）/脂酶/脂肪水解酶/脂肪分解酵素/PPL/Lipase(pocine pancreas);BR，3万u/g;5克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;9001-62-1;2～8℃
脂肪酶（假丝酵母）/脂酶/脂肪水解酶/脂肪分解酵素/三酰基甘油酰基水解酶/微生物脂肪酶/Lipase(Candida);BR，5000u/g;1克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;9001-62-1;2～8℃
过氧化氢酶（牛肝）/氯化酵素/接触酶/触酶/过氧化氢放氧酶/过氧化氢酵酶/血中氧化酶/CAT;BR，2000-5000u/mg;1克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;CAS:
无水葡萄糖D-Glucose anhydrous50-99-7含量：≥98.0%
D-氨基葡萄糖盐酸盐D-Glucosamine HC166-84-2含量：≥98.0%
N-乙酰-D-氨基葡萄糖D-GlcNAc7512-17-6含量：≥98.0%
D-纤维二糖D-cellbiose528-50-7含量：≥98.0%
D-阿拉伯糖D-(−)-Arabinose10323-20-3含量：≥98.0%
IL17A Protein Canine 重组狗 IL17 / IL17A 蛋白
小鼠内脏脂肪细胞完全培养基 100mL
FGFR4 Others Rat 大鼠 FGFR4 / FGF Receptor 4 人细胞裂解液 (阳性对照)
THP1-Blue-CD14(稳定株)人单核细胞 THP1-Blue-CD14 (stable sain) in human monocytes 1640+10% FBS(热灭活)+200ug/ml Zeocin+10ug/ml Blasticidin S+0.05mM β-ME
CM-R004大鼠气管上皮细胞完全培养基100mL
人神经细胞(HN) (10×106 ) 小鼠骨髓间充质干细胞(EGFP标记) MGC80-3(MGC-803)人胃癌细胞
CM-H121人神经少突起前质胶质细胞完全培养基100mL
LAYN Others Cynomolgus 食蟹猴 Layilin / LAYN 人细胞裂解液 (阳性对照)
人前列腺微血管内皮细胞HPrMEC
JCA-1细胞，人前列腺癌细胞 大鼠骨骼肌成肌细胞,L6细胞 小鼠少突胶质前体细胞MOPC
KP-N-NS(人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)) 5×106cells/瓶×2
A9(小鼠皮下结缔组织细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R019大鼠腮腺细胞完全培养基100mL 人胚肺成纤维细胞;MRC-5
线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒50管/48样费用IL17A Protein Canine 重组狗 IL17 / IL17A 蛋白
小鼠内脏脂肪细胞完全培养基 100mL
FGFR4 Others Rat 大鼠 FGFR4 / FGF Receptor 4 人细胞裂解液 (阳性对照)
THP1-Blue-CD14(稳定株)人单核细胞 THP1-Blue-CD14 (stable sain) in human monocytes 1640+10% FBS(热灭活)+200ug/ml Zeocin+10ug/ml Blasticidin S+0.05mM β-ME
CM-R004大鼠气管上皮细胞完全培养基100mL
人神经细胞(HN) (10×106 ) 小鼠骨髓间充质干细胞(EGFP标记) MGC80-3(MGC-803)人胃癌细胞
操作流程：
1. 线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒50管/48样费用 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
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文献和实验过滤孔，导致膜的寿命减短，分离效率较低。同时，外泌体会粘附在膜上，导致产量降低。 免疫磁珠法：用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。该方法分离得到的外泌体的生物活性易受 pH 和盐浓度影响，不利于下游实验。 试剂盒分离法：目前商业化的外泌体提取试剂盒多种多样，提取效果良莠不齐。同时试剂盒本身的价格比较高，且外泌体的得率和纯度一般，不是性价比高的一种分离方法。此方法得到的外泌体对于后续的鉴定实验、细胞实验和动物实验等可能有影响。 五、如何鉴定外泌
才可以成功。 1） 置凹玻片于显微镜下，低倍聚焦。 2） 调节持卵管，注射针与受精卵在同一视野下后，转换到高倍镜（32X）下时位置稍微低于受精卵，以便自如地操作受精卵。 3） 挨近注射针到工作液或油界边缘，稍微进入油界。在注射前，增加注射针的压力可见DNA溶液泡在油内形成囊状，以此确定DNA溶液流存在。 4） 如果未见DNA溶液流，则轻轻摩擦持样器钝缘，渐渐的打开注射器针头。针头重新进入油内确定DNA溶液流的存在。 5） 移动持卵管回到受精卵下部。通过微分驱动水压控制系统使持卵
DNA片段；（4）具有容易操作的检测表型。常用的质粒载体大小一般在1kb至10kb之间，如PBR322、PUC系列、PGEM系列和pBluescript（简称pBS）等。 从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞;分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上,同时由于细菌染色体DNA比质粒
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