粪便基因组DNA提取试剂盒

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粪便基因组DNA提取试剂盒
产地：国产|进口
CAS：BL1174
品牌：百奥莱博
规格：50T/100T
保存：室温(15℃-25 ℃) 干燥保存，复检期 12 个月，2 ℃-8 ℃保存时间更长。
注：试剂盒开封后溶液A、B 、C 、D 需在2-8℃保存。
产品简介:
本试剂盒适合于从各种粪便中提取微生物DNA。对粪便中各种细菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物DNA的多态性。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称取粪便样本 0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成细粉末，加入 450ul 溶液A 震荡混匀。
* 也可直接称取样本 0.1-0.5g 于离心管( 建议使用 2ml 圆底管) ，加入 450ul 溶液 A 剧烈震荡混匀 1-2min 至没有固体块。 使用液氮研磨效果最佳。
2 、加入50ul 溶液B 充分颠倒混匀( 不要剧烈震荡)，65℃水浴 6min，每2min充分颠倒混匀一次。
3 、加入100ul 溶液C 充分颠倒混匀( 不要剧烈震荡)，12000 rpm 离心10min 。
4 、将上清转移到新的离心管，12000rpm离心2min 。
5 、在吸附柱中加入 200ul 溶液D ，将离心后的上清加入到带有溶液 D 的吸附柱中，用移液器吹吸几次混匀，12000 rpm 离心1min。
6 、将收集管中的滤出液混匀后重新吸入吸附柱( 必须)，12000 rpm 离心1min。
7 、倒掉收集管中的废液，在吸附柱中加入漂洗液 500ul，12000 rpm 离心1min。
8 、倒掉收集管中的废液，重复步骤 7 两次(共漂洗三次)。
9 、倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管，12000 rpm 离心2min 。
10、拿出吸附柱在室温干燥数分钟( 因季节及气候等因素不等)，或50℃干燥1min。
11 、将吸附柱放入一个新的离心管中，加入 50-100ul 洗脱液(65 ℃预热)，12000 rpm 离心1min。
12、将离心管中的液体重新加入到吸附柱中，12000 rpm 离心1min。离心管中即为粪便微生物 DNA 溶液。
注意事项:
1 、新鲜的粪便样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。
2 、若溶液中出现浑浊可在 37℃水浴中溶解片刻至清澈，不会影响结果。
3 、在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
4 、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul ，体积过小会影响回收效率；建议使用试剂盒附带的洗脱缓冲液，用水洗脱也会损失部分产物；DNA应保存在-20 ℃避免反复冻融，以防降解。
5 、 液体试剂避免接触皮肤，若意外接触应立即使用大量清水冲洗。

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·无内毒素质粒小量提取试剂盒
编号：BL1158
规格：50T/100T
产品简介：本试剂盒采用可以特异性结合核酸的硅基质膜和碱裂解法提取细菌质粒DNA，从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA。所采用的内毒素清除剂能有效地去除质粒溶液中的内毒素，纯化的质粒内毒素含量小于0.1EU/ug。吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规的分子生物学试验，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染等试验。本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。
1、溶液P1在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA 全部加入)，混匀，置于2-8℃保存。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的无水乙醇)。
3. 使用前请先检查溶液P2、P3和P4是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
4. 洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)， pH值低于7. 0会降低洗脱效率。 DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5. 质粒DNA浓度＞1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于质粒DNA本身的性质，清除过程可导致部分质粒DNA丢失，但内毒素却能得到最大限度清除。
6. 所有溶液应用无内毒素的高纯水配制，所有器械材料均应不含内毒素，玻璃器皿可高温烘烤，非挥发性水溶液可高压处理。
7. DNA浓度及纯度检测：得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、 40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响吸光值，但并不表示纯度低。


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