昆虫质膜蛋白提取试剂盒

特别提示：包括昆虫质膜蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：昆虫质膜蛋白提取试剂盒
英文名称：Insect plasma membrane protein extraction kit
产品货号：HR8075
产品规格：50T/100T

动物膜蛋白承担各种生物功能，在生命的发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
昆虫细胞质膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从昆虫组织或培养细胞中温和、高效地抽提质膜蛋白。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白，单次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒(相关产品HR0165)。也可以将zuì后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去垢剂成分的蛋白提取试剂盒，总计300 多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液、溶解液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
【注】
蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便，从昆虫细胞，组织中提取蛋白不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约
含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取适量昆虫组织样本用剪刀尽可能剪碎，置于研钵中用液氮研磨。
【注】：
● 没有液氮也可直接加入试剂A 置冰上研磨即可。
3．研磨后加入500μl冷的提取液A，混匀后移入一个预冷的干净离心管中，在2-8℃振荡1小时。
【注】：
● 此步骤必须在2-8℃条件振荡。
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 如果没有2-8℃振荡条件，也可2-8℃冰箱静置，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔10分钟涡旋混匀。
4．将提取液在2-8℃低温下10000×g离心5分钟，取上清。
5．在上清中加入10μl抽提液B，充分混匀。
6．在37℃水浴10分钟。
7．在37℃，1000×g离心3分钟。
【注】：
● 此步骤必须在37℃条件下离心。
● 没有37℃离心条件也可以不离心，稍微延长37℃水浴时间，至液体澄清，分层清晰。
8．此时溶液会分为2 层，小心移除上层，吸取下层管底部膜蛋白部分大约30-50μl液体。
【注】：
●膜蛋白部分为粘稠状液体。
9．用50-150μl试剂C溶解该下层溶液，即得质膜蛋白样品。
10．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
膜蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大昆虫样品的上样量以提高膜蛋白浓度。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

除了昆虫质膜蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：辛甲基硫吡喃葡萄糖苷(OTG)
货号：BTN131045
规格：5g
OTG全名是1-s- 辛基-β-D-硫吡喃葡萄糖苷)，它是一种广泛用于溶解膜蛋白的非离子型去垢剂。已发现在一些生物系统中，该产品不受β 半乳糖苷酶的影响。光学上透明并且可透析。与辛甲基β 葡糖苷的溶解能力相同，但稳定性更好。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：牛血清白蛋白标准品(BSA标准品)(2mg/mL)
货号：BTN131070
规格：1mL
本产品为通用型标准品，被公认为比色法蛋白浓度测定中蛋白定量的工业标准；稳定纯度高，在0.9%的超纯生理盐水溶液(加0.05%的*氮化钠)中提供，室温下稳定；本产品浓度为2mg/mL。本品仅用于科研实验，不能用作医疗及临床诊断。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：0.9%NaCl溶液或PBS缓冲液、BCA工作液。

使用方法：
本产品可应用于蛋白分析定量(BCA蛋白分析、考马斯-Bradford分析等)、抗体脱盐回收或其他层析操作的对照、SDS-PAGE电泳和分光光度计紫外灯的常规校准(吸收峰在280nm)等实验。由于蛋白操作彼此差别太大，本手册只列出此产品用于BCA蛋白分析的实验流程，其他流程不在此详述。

1．标准品溶液的稀释方法见下表。此标准品溶液的稀释可使用去离子水、0.9% NaCl或PBS。

2mg/mL本产品(μl)	稀释液(μl)	稀释后产品终浓度(μg/ml)
120	0	2000
90	30	1500
60	60	1000
45	75	750
30	90	500
15	105	250
10	110	125
0	120	0(空白对照)

2．本产品标准曲线的制备
1)分别取50μL稀释后的本标准品溶液加入到1.5mL离心管中，每个浓度取2个平行样。
2)在每管中各加入1mL工作液后，立即混匀。
3)37℃水浴槽中反应30分钟后，冷却至室温。
4)使用分光光度计测定562nm处的吸光度值。测定时，使用1mL比色皿，用水校零。尽可能在20分钟内检测完毕所有样品。
5)各浓度本标准品溶液的吸光度值减去空白对照的平均值，绘制本标准品溶液的标准曲线。
3．检测样品的测定
 检测样品建议与本标准品溶液同时进行测定，测定方法同上，与本标准品的测定方法一致。如果必要也可选择与本标准品溶液相同的稀释方法稀释检测样品后测定。