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- 中杉金桥
- PV-9001
- 2025年08月29日
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已收到实际货物为准
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
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已收到实际货物为准
| 预期用途： | 主要用于免疫组织化学染色的显色。 | ||||||||||||||||||||||||
| 存储条件： | 2～8℃避光保存，不得冻存；产品有效期为12个月。 | ||||||||||||||||||||||||
| 检验原理： | 反应增强液促使增强酶标山羊抗兔IgG聚合物与结合在组织片上的一抗反应形成免疫复合物，聚合物上的HRP催化底物H2O2与DAB（或AEC）反应，最终形成棕褐色（或红色）不溶性色原，从而在显微镜下显示出组织片中的特定抗原的位点。 | ||||||||||||||||||||||||
| 试剂盒内容： |
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| 适用仪器： | 手工操作，机器染色 | ||||||||||||||||||||||||
| 检验方法： | 1、检验所需仪器、设备：移液器、恒温箱、修复仪、免疫组化笔、计时器、孵育盒、染色架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶。 2、试剂准备：显色液需要在使用前配制。 3、操作程序： a) 脱蜡和水化 石蜡切片置于新鲜二甲苯中，浸泡10分钟×3次；去除多余的液体后，置于无水乙醇中，浸泡3分钟×3次；去除多余的液体后，置于95%乙醇中，浸泡3分钟×2次；去除多余的液体后，置于75%乙醇中，浸泡3分钟×2次；蒸馏水冲洗1分钟，置于PBS缓冲液中。 b) 抗原修复，参见一抗说明书。 c) 阻断内源性过氧化物酶 加入适量的内源性过氧化物酶阻断剂，室温孵育10分钟；PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。 d) 滴加一抗 根据组织大小，滴加100μL或适量的一抗，37℃孵育60分钟；PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。 e) 滴加反应增强液 滴加100μL或适量的反应增强液，室温孵育20分钟；PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。 f) 滴加增强酶标山羊抗兔IgG聚合物 滴加100μL或适量的增强酶标山羊抗兔IgG聚合物，室温孵育20分钟；PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。 g) DAB显色 加入适量新鲜配制的DAB或AEC显色液，室温孵育5～8分钟。 h) 复染 自来水冲洗，苏木素染色液孵育20秒；分化、冲洗返蓝。 i) 脱水、透明、封片 j) 阅片。 4、结果判定，染色结果须由有资质的病理医生对染色后的组织片在光学显微镜下观察并进行判读。 |
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| 检验结果的解释： | 1、抗原修复、孵育时间、温度的修改或使用其他方法均有可能导致错误结果。 2、在每一次染色过程中，必须有空白对照和阴性对照实验同时进行。 3、如果阳性组织对照不能显示适当的阳性染色，应判定该批次样本的检测结果无效。 4、若反应增强液或增强酶标山羊抗兔IgG聚合物孵育温度过高或孵育时间过长，可能导致染色过强及背景染色。 |
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| 检验方法的局限性： | 1、免疫组织化学染色是一种需通过多个操作步骤完成的检测过程，在组织前期处理和实验过程中的不规范操作，有可能影响实验结果。 2、专业的操作人员、经过认证的实验室和标准化的实验流程，可以减少各种外界因素造成的操作偏差。 3、红细胞和细胞色素C可能会造成假阳性结果。 4、阴性结果表示未检出抗原，不一定表示样本中无该抗原存在；待测抗原编码基因变异、抗原低表达或抗原修复不当等，都会造成抗原无法检出。 5、本试剂仅对10%中性缓冲福尔马林固定石蜡包埋的组织进行了验证，不作其他用途。 |
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| 产品性能指标： | 1、装量：试剂盒各组份的溶液装量应不少于标示装量。 2、符合性：取符合性组织片（包括阳性组织对照和阴性组织对照），经相应的免疫组化实验后，应阳性着色定位准确，且无背景染色；同时，空白对照和阴性对照染色结果为阴性。 3、批内重复性：取同一批次的试剂盒，检测组织片3片，染色强度和定位无明显差异。 |
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| 注意事项： | 1、本染色液仅用于免疫组化，不做其他用途。 2、本染色液仅限专业人员使用。应用适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。 3、染色液中的DAB底物液为致癌物质，操作中应采用合理的防护措施。 4、超过有效期的试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒。 5、脱蜡不彻底，容易影响染色效果，建议免疫组化切片脱蜡与常规HE脱蜡分开。 6、为防止可能出现的假阳性、假阴性结果，在实验过程中需设置阳性与阴性对照。 7、实验中滴加试剂时，过多的PBS缓冲液会导致试剂被稀释，将引起染色强度变弱，因此，滴加试剂前应除去多余的缓冲液。 8、使用中所产生的各种废弃物都应按《医疗废物管理条例》处理。 |
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文献和实验组化技术的进展1.1检测技术的进展自1941年Coons及其同事发表免疫荧光技术至今已有半个多世纪，随后免疫组化技术也逐步发展、检测技术的进步主要表现在敏感性的提高，以及特异性增强，即可使用较少的抗体检测出针对性的抗原，而又有极少或没有非特异性背景呈色。此外，整个免疫染色时间也更加缩短。这主要表现在以下几方面：1．1．1 检测步骤由直接法走向间接法。包括大家熟悉的一般间接二步法、PAP法、ABC法、LAB－SA法，现在大家认为以LAB-SA法最为优越。目前曾有将多聚体氧化酶直接连接在第一
度提高了许多。 3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中 SP 法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 4. 目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1）免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧
都游离在溶液中，而固相杂交是将参加反应的一条核酸链固定在固体的支持物上常用的有硝酸纤维素滤膜，其它如尼龙膜、乳胶颗粒和微孔板等），另一条参加反应的核酸链游离在溶液中。固相杂交有菌落原位杂交（colony in situ hybridization）、斑点杂交法（Dot blot）、Southern印迹杂交（Southern blot）、Northern印迹杂交（ Northern blot）和组织原位杂交（Tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位
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