Caspase 9分光光度法检测试剂盒

特别提示：包括Caspase 9分光光度法检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Caspase 9分光光度法检测试剂盒
英文名称：Caspase-9 Colorimetric Assay Kit
产品货号：KFS206
产品规格：20T|50T|100T

本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-9 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用。Caspase-9 是级联酶的上游分子，可被线粒体向细胞质释放的细胞色素C 激活。激活的Caspase-9 可引起下游级联酶的活性，如Caspase-3。Caspase-9 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段时则被激活。Caspase-9 分光光度法检测试剂盒就是将caspase-9 序列特异性的多肽偶联至发色基团，当该底物被caspase-9 剪切后，发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，可考察caspase-9 的活化程度。

注意事项
1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-9 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-9 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3～5×106 个或新鲜组织50-100mg，以便能达到测定需要的100～200μg 蛋白的要求，因为Caspase-9 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的OD 值偏低，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

除了Caspase 9分光光度法检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)
货号：YT125
规格：100次|500次
本试剂盒也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸 脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。

本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。

细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行 细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。

本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下：



试剂盒组份（100次为例）：
LDH释放试剂——————1.5ml
乳酸溶液———————2ml
酶溶液————————1ml×2
INT溶液(10X)—————0.2ml
INT稀释液——————2ml

注意事项：
1. 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。
2. 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检 测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。
3. 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
4. 如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量，用户需自备乳酸脱氢酶标准品。

储存条件：-20℃，有效期一年。