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文献和实验大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用
得到:1 A280 =1.62 mg/ml。 4. 酶活力测定 1) 氨基酸活化反应的条件如下:35ul反应液中含有100 mM HEPES (pH 7.8),10mM KF,10 mM MgCl2 ,4 mM ATP,2 mM [32 P] PPi和1 mM亮氨酸,在37o C保温,用约4 nmol/L LeuRS起始反应,于不同时间,取出15ul反应液,加入200ul淬灭液中(3.5%高氯酸,2%活性炭和0.05 M焦磷酸钠)停止反应,在淬灭液中再加入5毫升10 mM焦磷酸
Deglycosylation of Glycoproteins Using Endoglycosidases
Enzymes, Substrates and Buffers: PNGase F1 Didansyl-fetuin glycopeptide (L-A-N(CHO)-AeC-S, triantennary), 100 mM Hepes, pH 8.6 Endo F1 Dansyl-N-(GlcNAc)2 (Man
将其稀释至 1 mg/mL 以降低缓冲体系中去污剂的浓度(但对于那些在细胞中表达水平较低的蛋白而言,10 mg/mL 这样更高的浓度可能对免疫沉淀更有效一些)。 加入推荐体积的免疫沉淀抗体至 500 µL 细胞裂解液中与目标蛋白反应。(抗体的最适用量要根据每一细胞模型中免疫沉淀靶蛋白的数量来确定)。 将细胞裂解液与抗体轻轻混匀后孵育 2h,或 4℃ 缓慢振荡过夜。(选择孵育 2h 常用于免疫沉淀与激酶或磷酸酯酶作用的活化酶。)加入100 µL Agarose protein A+G 轻轻振荡 1h
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