红霉素溶液(50mg/ml)试剂

特别提示：包括红霉素溶液(50mg/ml)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：红霉素溶液(50mg/ml)
英文名称：Erythromycin Solution
产品货号：GL0008
产品规格：10ml

用途：
与细菌的聚核糖体结合而抑制肽链的延伸，主要对革兰氏阳性菌具有抗菌性

储存条件：-20℃，避光，12个月

除了红霉素溶液(50mg/ml)试剂,，我公司还供应以下相关产品：



名称：青链霉素溶液(100×)
货号：RFT181
规格：100ml
青霉素-链霉素溶液(100×)是专门用于细胞培养的双抗，经过过滤除菌，可以直接添加到细胞培养液内。一个包装即100ml青霉素-链霉素溶液(100×)可以配制10L细胞培养液。

青霉素-链霉素溶液(100×)中，青霉素的含量为10KU/ml，链霉素的含量为10mg/ml。该溶液用0.85%氯化钠配制。在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml，即按照100倍稀释使用即可。

使用方法：
1、在无菌的细胞培养液中直接添加青霉素-链霉素溶液(100X)，比如按照每500ml细胞培养液添加5ml的比例加入青霉素-链霉素溶液(100X)，混匀即可使用。
2、配制细胞培养液时加入青霉素-链霉素溶液(100X)，然后再过滤除菌。配制细胞培养液时按照每配制1L细胞培养液加入10ml的比例加入青霉素-链霉素溶液(100X)，配制完成后过滤除菌即可使用。

储存条件：-20℃。

名称：泰乐菌素
货号：QN0016
规格：1g|5g
CAS：1401-69-0
分子式：C46H77NO17
分子量：916.1
别名：太乐菌素;泰乐霉素;泰洛霉素;泰洛星
储存条件：2～8℃

名称：潮霉素B
货号：QN0023
规格：1g
本品常用做蛋白质合成抑制剂，可用于植物细胞培养等生化研究。本品是潮霉素B干粉，用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水，PBS溶液。

CAS：31282-04-9
储存条件：-20℃
别名：湿霉素乙;效高素;潮霉素B干粉
效价：≥950U/mg

潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

使用方法

1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定zuì佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素zuì低浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
 

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的zuì低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果zuì好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，zuì好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。

注意事项：
1)潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自大肠杆菌之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2)本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。