EHA105农杆菌感受态细胞

特别提示：包括EHA105农杆菌感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：EHA105农杆菌感受态细胞
英文名称：EHA105 Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0054
产品规格：10×100μl/50×100μl

EHA105菌株由EHA105菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pEHA105(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予EHA105菌株链霉素抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达104cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
C58(rif R)Ti pEHA105(pTiBo542DT-DNA)(strepR)Succinamopine
操作说明：
1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100μl感受态加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3.加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50μg/ml kan，20μg/ml rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
注意事项：
1、 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。
3、转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
4、利福平浓度不应高于25μg/μl，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/ml kan，若所用平板含有20μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

除了EHA105农杆菌感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：单细胞裂解液(RNA提取)
货号：BTN130804
规格：1mL
本产品为单细胞RNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定含有常用。纯化所得RNA可用于测序、单细胞PCR等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)
货号：BTN90407B
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：青霉素G钠盐溶液
货号：BTN120698
规格：10mL
本产品为浓度200mg/mL的青霉素G钠盐溶液，参考浓度100mg/mL。青霉素G 钠盐(苄基青霉素钠盐；Benzylpenicillin sodium salt)，分子式：C16H17N2NaO4S，分子量：356.37，CAS号：69-57-8。溶于水。常用的用途有生化研究、培养基的配制和抗生素等。

储存条件：低温运输、-20 ℃避光保存，有效期为6个月。

名称：N端mCherry标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白)
货号：YT477
规格：1μg
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含mCherry (DsRed的突变体，一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个mCherry的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有mCherry标签的融合蛋白。利用mCherry的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用mCherry抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mCherry与GFP没有序列同源性，不能使用GFP抗体检测mCherry。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
mCherry	677-1384
Multiple cloning site	1385-1474
T7 promoter and T7 primer binding site	1494-1515
SV40 polyA signal	1527-1910
f1 origin of ss-DNA replication	2048-2354
bla promoter	2379-2503
SV40 promoter	2523-2861
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2896-3687
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3688-4146
pUC origin	4275-4942

本质粒(4994bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。