人血管紧张素转化酶2(ACE2)ELISA Kit

人血管紧张素转化酶2(ACE2)ELISA Kit

Cell culture supernatant, serum, plasma

适用于定量检测天然和重组人 ACE-2 的浓度

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I. 背景
血管紧张素I转换酶(ACE-2)，也称为ACE (ACE同系物)，是ACE家族的二聚体、锌依
赖性金属蛋白酶，其家族也包括体细胞ACE和生殖细胞ACE (1, 2)。全长ACE-2蛋白包括
一个由单个N-端肽酶结构域和C-端集合样结构域(CLD)组成的胞外区域、一个跨膜结构域
和一个短的细胞质尾(3)。N-端肽酶区域是与SARS-CoV和SARS-CoV-2 spike蛋白结合所
必需的，而CLD包含一个促进二聚化和与氨基酸转运体结合的区域(2)。肽酶结构域包含
一个长而深的裂隙，该位点在底物和抑制剂结合时经历一个大的“铰链弯曲”运动(3)。经典
的ACE抑制剂如卡托普利和赖诺普利不能抑制ACE-2的活性，ACE-2的抑制剂也不能抑制
ACE的活性(4)。ACE-2 mRNA在心脏、睾丸和肾脏中含量较高，在其他多种组织中表达
水平较低(1, 5)。ACE-2是体内SARS-CoV和SARS-CoV-2 Spike蛋白受体，作为一种羧肽
酶催化裂解包括血管紧张素I和II在内的几种底物，并作为B0AT1家族氨基酸转运蛋白的伙
伴(1, 2, 6-8)。通过这些功能，已证实ACE-2参与了多种疾病，包括SARS、COVID19、
急性肺损伤、心脏病、肝和肺纤维化、炎症性肺病和心肺疾病(6, 9-13)。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 632.6 2296.0 8910.6 644.5 2340.7 9049.1
标准差 16.1 85.1 416.0 25.9 112.7 427.7
CV% 2.5 3.7 4.7 4.0 4.8 4.7
B. 回收率
不同的样本中掺入检测范围内不同水平的人ACE-2，测定其回收率。
样本类型 平均回收率 (%) 范围 (%)
细胞培养基 (n=4) 110.0 106.8-111.9
人血清 (n=4) 105.3 96.0-115.0
人血浆 (n=4) 114.3 111.2-119.7

C. 灵敏度
人ACE-2的最低可测剂量（MDD）一般小于6.023 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的NS0细胞表达的高纯度重组人ACE-2蛋白所校
正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人ACE-2，然后用标准品稀释液（1×）将样本稀释到
检测范围内，测定其线性。

A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人ACE-2抗体包被于微孔板上，样品和标准品中
的人ACE-2会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗人
ACE-2检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过氧化
物酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本、人血清样本和人血浆样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。