美国Nalgene 冻存1℃冻存容器，“梯度降温盒”，聚碳酸

细胞的冻存与复苏

推荐使用程序降温盒，分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜； 7、 如没有程序降温盒，则按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存，注意转移过程中要保冷，避免产生温差或冻存管融化； 8、 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。   注意事项： 1、 DMSO配制的时候会放热，一定要等冻存液冷却后使用，避免灼伤细胞； 2、 细胞离心后尽量吸干净上清液，减少培养基残留，避免稀释冻存液； 3、 不建议手动梯度降温，温度不稳定，容易

写给细胞小白的实用手册

）：另取一离心管，加入基础培养基，逐滴加入二甲基亚砜 （DMSO），即制冻存 B 液，置于室温下待用，胎牛血清作为冻存 A 液，基础培养基：DMSO：胎牛血清 = 5:4:1。3. 细胞悬液和冻存液混匀：细胞离心毕弃去上清液。用血清重悬起细胞，缓慢加入冻存 B 液，轻轻吹打使细胞均匀。4. 分装：分装在 1 ml 冷冻管中，严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。5. 梯度降温冻存： 4 ℃，30 min → -20 ℃，10 min → -30 ℃，30 min→ -70 度冰箱过夜 → 置于液氮灌中

细胞冻存的程序降温盒的使用注意事项

醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理论上是5次以后更换异丙醇，但是异丙醇对环境有害，我们可以多用几次，只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO 对细胞有毒性，尤其是室温的时候，所以冻存盒和冻存液先放4°，等把细胞用冻存液重悬好了放在冻存盒里，还放回4°，等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。过夜再转入液氮。 程序降温盒这个梯度降温可大大提高细胞冻存的存活率，由于程序降温盒内存在100%浓度的异丙醇和泡沫内衬，因此程序降温盒也可以用于细胞复苏。