PACAP ELISA Kit 使用说明书

产品名称：PACAP ELISA Kit 使用说明书
英文名称：Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP Elisa Kit
规格：96T/48T
检测标本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。提供免费代测服务。
规    格：96T/48T
保    存：2-8℃
主要用途：科研检测

PACAP ELISA Kit 使用说明书1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。
2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。

1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照) 3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

PACAP ELISA Kit 使用说明书安全性
1）避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请赶快用水冲刷。
2）实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
PACAP ELISA Kit 使用说明书样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

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癸烷磺酸钠/1-癸烷磺酸钠/十烷磺酸钠/十烷基磺酸钠/正癸磺酸钠盐/正癸基磺酸钠/Sodium 1-decanesulfonate;IPC，99%;5克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;13419-61-9;RT
1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸钠/H酸单钠盐/4-氨基-5--2,7-萘二磺酸一钠/H酸一钠盐/1-氨基-8-萘酚-3，6-二磺酸单钠盐/H-酸钠盐/8-氨基-1-萘酚-3,6-二磺酸单钠盐/H acid monosodium salt;CP，95%;250克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;CAS: 5460-09-3 ;RT，避光
蒽醌-2-磺酸钠/银盐/蒽-2-磺酸钠盐/9,10-蒽醌-2-磺酸钠盐/Anthraquinone-2-sulfonic acid sodium salt monohydrate;BR，97%;25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;153277-35-1;RT
苯亚磺酸钠/Benzenesulfinic acid sodium salt;CP，98.5%;100克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;873-55-2;RT，避光
苦酮酸/4-硝基-3-甲基对基-5-吡唑啉酮/3-甲基-4-硝基-1-(对)-2-吡唑啉-5-酮/1-(对)-3-甲基-4-硝基-5-吡唑啉酮/4-硝基-3-甲基-1-(对)-5-吡唑啉酮/3-甲-4-硝-1-对硝苯-5-吡唑啉酮/Picrolonic acid;CP，98%;25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌;550-74-3;RT
PACAP ELISA Kit 使用说明书7-羟基-4-甲基香豆素4-MU90-33-5含量：≥98.0%
缩节胺Mepiquat chloride24307-26-4含量：≥98.0%
噻苯隆TDZ51707-55-2含量：≥98.0%
生根粉Rooting Powde含量：≥98.0%
花宝2号Hyponex NO.2含量：≥98.0%

PACAP ELISA Kit 使用说明书1）运用前，将所有试剂充沛混匀。不要使液体发生很多的泡沫，防止加样时参加很多的气泡，发生加样上的差错。
2）依据待测样品数量加上规范品的数量决议所需的板条数。每个规范品和空白孔主张做复孔。每个样品依据自个的数量来定，能运用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后参加50ul于反响孔内。
3）参加稀释好后的规范品50ul于反响孔、参加待测样品50ul于反响孔内。当即参加50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，悄悄振动混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。
5）每孔参加80ul的亲和链酶素-HRP，悄悄振动混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。
7）每孔参加底物A、B各50ul，悄悄振动混匀，37℃温育10分钟。防止光照。
8）取出酶标板，敏捷参加50ul停止液，参加停止液后应当即测定成果。
9）在450nm波利益测定各孔的OD值。