NADH氧化酶(NOX)测试盒(微量法)

特别提示：包括NADH氧化酶(NOX)测试盒(微量法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：NADH氧化酶(NOX)测试盒(微量法)
产品货号：SK007-1
产品规格：100管/96样

测定意义:
NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。

测定原理：
NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

除了NADH氧化酶(NOX)测试盒(微量法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(双试剂直接法)(酶标仪及生化分析仪)
货号：SNM222
规格：96T(25ml)
检测指标：低密度脂蛋白胆固醇;LDL

名称：人尿粪隐血测试盒(联běn胺法)
货号：SNM302
规格：100T
检测指标：人尿粪隐血
本试剂盒可用于各种动物粪便类样本的测定。隐血是指胃肠道少量出血，肉眼及显微镜均不能证实，还对可利用血红蛋白有关的过氧化物酶作用，能催化过氧化氢释放新生态氧，氧化色原物质而显色，通过这种方法检测有无消化道少量出血。对慢性消化道出血，如：消化性溃疡，药物对胃粘膜的损伤、肠结核、克隆病等和消化道恶性肿瘤（如：胃癌、结肠癌等）的筛选均有重要价值。

操作步骤：
1、滴加试剂一（邻联甲*胺溶液）2～3滴于白瓷板上；
2、滴加试剂二（过氧化氢）1～2滴；
3、如不变色，立即挑取粪便少许与上述试剂混合；
4、观察结果。
【或先将粪便涂于白瓷板（或白色滤纸）上，滴加试剂一（邻联甲*胺液），再滴加试剂二（过氧化氢液），观察结果。】

四、结果分析：
阴 性（-）：3分钟后不显蓝绿色；
弱阳性（+）：30～60秒钟内显蓝色；
阳 性（+ +）：立即显蓝绿色；
强阳性（+ + +）：立即显深蓝色。

名称：活性氮(RNS)检测试剂盒
货号：HR8791
规格：100T/200T
活性氮(reactive nitrogen species，RNS)是指NO 与包括活性氧在内的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO·及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物,这些与活性氧相对应的以NO 为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一*化氮(NO)和二*化氮(NO2)、过氧化亚硝酰阴离子(ONOO·)、亚硝酰氢(HNO)、亚硝酸根离子(NO2-)和氨等。
活性氮检测试剂盒是一种利用荧光探针R21 进行活性氮检测的试剂盒。R21探针本身荧光很弱，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成R21D。而R21D不能通透细胞膜，从而使探针很容易被标记到细胞内。在活性氮存在的条件下，R21D 与活性氮反应生成强荧光物质R21F，R21F发出的绿色荧光强度与细胞内活性氮水平成正比，检测R21F 的荧光就可以知道细胞内活性氮的水平。R21F 的荧光zuì大激发波长是490nm，zuì大发射波长是516nm。
活性氮检测试剂具有高的灵敏度，良好的选择性，短的响应时间，以及可对检测对象在原位进行实时监控和观察等。更重要的是，这种检测技术对细胞内活性氮的内源性分布不产生巨大的外加干扰，从而能zuì大程度地得到内源性活性氮变化的真实信息。
在激发波长488 nm，发射波长516 nm 附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测R21F荧光，从而测定细胞内活性氮水平。
本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● HBSS ●培养基 ● 移液器及吸头 ● 离心机
● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长490 ± 10 nm，发射波长510 ± 10 nm，或者按照FITC荧光检测条件检测。

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
●对于药物作用时间较短(小于2 小时)的细胞，可以先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6 小时以上)的细胞，先用相应的药物刺激细胞，后标记探针。
● R21染色液为DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO 溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定zuì佳条件。以下方法仅供参考。
● 酚红对R21荧光探针的检测有干扰，需避免。
●染色后立即进行分析。
● 以下步骤仅做为参考，稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如，对于某些细胞，如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱，可升高R21 探针浓度，以提高检测的灵敏度。另外，探针装载的时间也可以根据情况在15-60 分钟内适当进行调整，孵育温度在4℃-37℃内调整。

1．探针染色工作液配制：
根据样本数量，用HBSS将R21荧光染料100倍稀释，配制成染色工作液。
【注】:
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或PBS 稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的zuì佳工作浓度，一般染色终浓度100-1000 倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和线粒体毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外，浓度过高也可能造成非特异性染色，对其他细胞结构进行染色。
● 工作液现配现用。
2．细胞探针标记
2.1对于贴壁细胞，可以进行原位标记
1)培养皿/培养板准备细胞样本。
2)待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育20 分钟～30 分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
【注】:
● 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
3)移除染色液，用PBS(pH7.4)洗涤细胞3次。
【注】:
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)荧光显微镜(含合适滤片)或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。zuì大激发/发射波长为488/516nm。
2.2对于悬浮细胞
1)离心，吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液100-200ul 重悬细胞，于生长状态下孵育20 分钟～30 分钟(具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
3)离心，吸除染色液，加入PBS(pH7.4)重悬细胞，洗涤3次。
4)流式细胞仪、荧光酶标仪检测。zuì大激发/发射波长为488 / 516nm。
【注】:
●对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
● 如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前可以先用多聚赖氨酸(poly-D-lysine)包被载玻片或盖玻片。
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
3．检测：
对于原位标记探针的样品可以用荧光显微镜，激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察亦可。
使用488nm激发波长，516nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
R21F的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置进行检测。