弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒

弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 两管式 RT-PCR，一次 RT 反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供 10 次的 RT 反应试剂和 50 次的 PCR 试剂。
3. 引物经过优化，特异性高，引物是根据基因的保守区域设计，适用于所有强、中、弱新城疫毒株，产物长度为 421 bp。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒特点优势：
    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
    4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
    5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
    6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒性能指标：
1. 试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
规格及成分 

成分	编号	50 次纸盒包装
MMLV 逆转录酶 (含 RI)	80206A	20 μL
RT Buffer（含 dNTP）	60906C	60 uL
PCR Mix 3.0（含染料）	90805	1.5 mL
ND 阳性对照	896897	50 μL
ND 专一性引物一（正向引物）	yw896	50 μL
ND 专一性引物二（反向引物）	yw897	50 μL
RNase-free 水	80403	1 mL
使用手册	11-171201sc	1 份

运输及保存:低温运输,-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂：样品 RNA。
弯曲菌单重荧光PCR检测试剂盒使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:

RNA 模板	0.01pg-500 ng （如果丌知道浓度则用 1-10 μL）
ND 专一性引物二（反向引物）	2 μL
RNase-free 水	补水到 12 μL

2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
三、PCR（60 μL 体系）
1、在 PCR 管中加入下列成分：

成 份	样品	ND 阳性对照	阴性对照
PCR MagicMix 3.0	30 μL	30 μL	30 μL
cDNA 样品（上步的 RT 反应液）	1-5 uL	无	无
ND 阳性对照	无	2 μL	无
ND 专一性引物一（正向引物）	1 μL	1 μL	1 μL
ND 专一性引物二（反向引物）	1 μL	1 μL	1 μL
补水到	60 uL

2. PCR 反应参数：

过程	温度	时间	其他
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （40个循环）	95℃	30 s
	50℃	30 s
	72℃	40 s
最后延伸	72℃	5 min

四、电泳检测
1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。
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