A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株

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培养条件
A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株F12K培养基(添加NaHCO3 2.5g/L, DDP 1.0mg/L)，90%；优质胎牛血清，10%
气相：空气，95%；二氧化碳，5%
温度：37摄氏度
细胞描述
A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株细胞生长：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞数量：1×106个
细胞传代：1:3~1:8传代；2~3天换液1次
细胞特性：A549细胞通过DDP间接诱导的方法（DDP起始浓度为1ug/mL, 逐级提高DDP浓度，直至细胞能在28ug/mL DDP的培养液中稳定生长与传代）建立DDP耐药细胞株。
细胞纯度：93％
细胞活力：87％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）
细胞运输：干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）

细胞传代： 
A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株1. 显微镜下观察细胞，神经干细胞悬浮成“神经球”生长，通常情况下，每两天换液一次，每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中，将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟，收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶，在超净工作台中轻轻吹打10次，注意不要消化太久，消化的目的是缩小神经球的体积，不要消化能单个神经干细胞，那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基，吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后，去掉上清，用新鲜培养基重悬细胞，按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏： 
1. A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株 取出冻存管后，投入37℃水浴中，震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心（1000rpm，5 min）。
4. 弃去上清，再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基，转入培养瓶中培养。
细胞冻存：液氮冻存（冻存液：DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO）。
细胞运输：干冰运输（冻存管）/ 常温运输（T-25培养瓶）
细胞鉴定：神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态，放大倍数为200x，右图为nestin染色后的荧光图片（绿色），放大倍数为200x。
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A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株2-壬醇2-Nonanol628-99-9含量：≥98.0%
十八醇1-Octadecanol112-92-5含量：≥98.0%
十六醇1-Hexadecanol36653-82-4含量：≥98.0%
十五醇1-Pentadecanol629-76-5含量：≥98.0%
十四醇Tetradecanol112-72-1含量：≥98.0%
A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮，因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换；而是每 2 到 3 天加料一次，直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞，然后继续培养扩增，或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞，将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。