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- 2025年07月15日
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- 细胞类型：
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- 供应商：
上海博湖
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41
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- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 年限：
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- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 器官来源：
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- 是否是肿瘤细胞：
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- 细胞形态：
上皮样/成纤维样/其它
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- 物种来源：
人/小鼠/大鼠/其他
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- 组织来源：
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- 规格：
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培养条件
A7r5，大鼠胸大动脉平滑肌细胞DMEM培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。
温度：37℃。
细胞描述
A7r5，大鼠胸大动脉平滑肌细胞细胞生长：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样，多角形
细胞数量：1×106个
细胞传代：1:2~1:3传代；每周换液1~2次
细胞特性：培养到稳定期后细胞表现出长高的肌激酶和肌氨酸磷酸激酶活性(CPK)。细胞分裂终止后合成骨肉型CPK。
细胞纯度：93％
细胞活力：87％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
细胞冻存：液氮冻存（基础培养基+10%DMSO+20%FBS）
细胞运输：干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）
细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗
细胞传代：
A7r5，大鼠胸大动脉平滑肌细胞1. 显微镜下观察细胞，神经干细胞悬浮成“神经球”生长，通常情况下，每两天换液一次，每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中，将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟，收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶，在超净工作台中轻轻吹打10次，注意不要消化太久，消化的目的是缩小神经球的体积，不要消化能单个神经干细胞，那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基，吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后，去掉上清，用新鲜培养基重悬细胞，按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏：
1. A7r5，大鼠胸大动脉平滑肌细胞 取出冻存管后，投入37℃水浴中，震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心（1000rpm，5 min）。
4. 弃去上清，再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基，转入培养瓶中培养。
细胞冻存：液氮冻存（冻存液：DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO）。
细胞运输：干冰运输（冻存管）/ 常温运输（T-25培养瓶）
细胞鉴定：神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态，放大倍数为200x，右图为nestin染色后的荧光图片（绿色），放大倍数为200x。
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A7r5，大鼠胸大动脉平滑肌细胞悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮，因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换；而是每 2 到 3 天加料一次，直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞，然后继续培养扩增，或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞，将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。
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文献和实验我养了快半年的大鼠气道平滑肌细胞，有一点体会，特发上来和各位战友交流一下，互相进步。 壹． 器械 显微器械：眼科剪一把，直弯眼科镊各一把，细结镊一把，手术刀一把，针头诺干 杀老鼠器械：手术剪一把，大镊子一把，弯眼科镊一把，组织钳一把，50ml烧杯一个（锡纸包好） 另外：10ml离心管两个，培养皿两个，10ml的瓶子三个，小滤器两个，硅胶板一块，培养瓶盖子诺干 贰。试剂 D-HANKS液250ml，双抗2ml（青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml），一型胶原
镊子1把 、大头针4个、手术刀片、无菌1×PBS约500ml 20%FBS的DMEM、5ml小皿3个、 10ml大皿1个、杀鼠板1块。（以上均为无菌物品） 实验步骤 1、 150-200gSD-大鼠，短头，浸入75%的酒精中15min 2、 置入超净台中，将大鼠固定于杀鼠板上，在无菌条件下打开腹腔，分离出胸主、腹主，摘出。 3、 PBS清洗3遍，剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其移入1ml的培基中、剪成1×1mm大小组织块。 4、再将PBS清洗组织块，移入25ml的培养瓶中，用尖嘴弯管均匀
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