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- 经科
- JKG272
- 中国
- 2025年10月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量现货供应
- 英文名：
钙荧光探针Fluo-3,AM
- CAS号：
121714-22-5
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
见说明书
- 规格：
1mg
CAS#：121714-22-5
中文名：钙荧光探针Fluo-3, AM
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
分子式：C51H50Cl2N2O23
分子量：1129.85
性质：
1. 外观：红色粉末
2. 纯度：≥90%（HPLC）
3. 产品描述：
Fluo-3, AM是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内，Fluo-3若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525～530nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
4. 操作说明（for Human T cells）*
（1） 试剂
2 mM的Fluo-3, AM/DMSO（将1mg Fluo-3, AM溶于442µL DMSO）
Pluronic F127
Hanks•balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
（2） 操作
①. 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以 防止Fluo-3, AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
②. 用HBSS稀释Fluo-3, AM溶液，制备4µM的Fluo-3, AM工作液。
③. 将Fluo-3, AM工作液加入细胞，在37℃培养20分钟。
④. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
⑤. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×105 cells/mL的溶液。
⑥. 37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长506nm，发射波长526nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
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文献和实验作用。在哺乳动物的神经系统中，钙离子是一类重要的神经元胞内信号分子，神经元静息状态下，胞内钙离子浓度约为50-100nM，而当神经元活动的时候，胞内钙离子浓度能上升10-100倍，而钙离子对于突触囊泡释放必不可少；神经元在放电的时候会爆发出一个短暂的钙离子浓度高峰，这意味着神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动。神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动示意图因而，神经元钙离子成像技术的原理就是借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系，利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针（钙离子指示
内酯酶水解后并与胞内游离钙结合后发出荧光。Kd值为Ca2+解离常数，表明检测Ca2+浓度的范围:0.1xKd-10xkd, Kd和很多因素有关，如pH、 Mg2+、与蛋白的结合、温度等。细胞内生理Ca2+浓度值(10-100n M)，细胞内Ca2+超载浓度值(基础Ca2+浓度的10倍左右) 荧光探针 激发波长 发射波长 Kd FLuo3-AM, K+, dextran 506nm 525nm 390nM Fluo4 506nm 525nm
Fluo-3-Am为一新型的高度特异性Ca2+荧光指示剂，可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化，Fluo-3-Am进入细胞后经非特异性酯酶脱去Am酯，成为脂溶的Fluo-3留在细胞内，当Fluo-3与细胞内游离钙结合后，其荧光强度是Fluo-3本身的40倍以上，当用480nm波长激发时，其荧光强度与游离钙离子浓度成正比。具体如下：1、钙荧光探针负载；取细胞悬液，加Fluo-3-Am至10μmol/L，置二氧化碳培养箱中孵育1h，其间轻微振荡3次。离心，去掉多余的染料。再用无钙缓冲液反复洗涤
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