小鼠神经干细胞

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培养条件
小鼠神经干细胞培养基：DMEM/F12+1%N2+2%B27
气相：空气，95%；二氧化碳，5%
温度：37摄氏度
细胞描述
小鼠神经干细胞细胞描述：本公司培养出品的神经干细胞（NPC）取自12天C57小鼠胚胎的端脑，用DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基进行原代培养和传代。
细胞生长：神经干细胞悬浮成“神经球”生长。
细胞规格：1ml 冻存管 （1x106）或者 1个25cm2的培养瓶。
细胞活力：＞90%
细胞代数：P2~P3
细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
细胞传代： 
小鼠神经干细胞1. 显微镜下观察细胞，神经干细胞悬浮成“神经球”生长，通常情况下，每两天换液一次，每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中，将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟，收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶，在超净工作台中轻轻吹打10次，注意不要消化太久，消化的目的是缩小神经球的体积，不要消化能单个神经干细胞，那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基，吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后，去掉上清，用新鲜培养基重悬细胞，按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏： 
1.小鼠神经干细胞 取出冻存管后，投入37℃水浴中，震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心（1000rpm，5 min）。
4. 弃去上清，再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基，转入培养瓶中培养。
细胞冻存：液氮冻存（冻存液：DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO）。
细胞运输：干冰运输（冻存管）/ 常温运输（T-25培养瓶）
细胞鉴定：神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态，放大倍数为200x，右图为nestin染色后的荧光图片（绿色），放大倍数为200x。
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卵磷脂吐温80营养琼脂      250    用于化妆品细菌总数测定（GB标准）    
乙酰胺琼脂       250    用于绿脓杆菌的选择性分离培养（GB标准）    
十六烷三化铵琼脂      250    用于绿脓杆菌的选择性分离培养（GB标准）    
甘露醇发酵培养基      250    生化试验培养基，用于细菌（如金黄色葡萄球菌）甘露醇发酵试验（GB标准）    
明胶培养基基础      250    生化试验培养基，用于细菌明胶液化试验（GB标准）    
绿脓菌素测定培养基(PDP)       250    用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验（GB标准）    
乳糖胆盐培养基       250    用于化妆品中粪大肠菌群的测定（GB标准）    
TTC卵磷脂-吐温80-营养琼脂       250    用于化妆品中细菌总数测定（GB标准）    
HC琼脂基础    250    用于化妆品中霉菌总数测定(Acumedia 方法)    
改良LETHEEN琼脂基础    250    用于化妆品中微生物检测(Acumedia 方法)    
液体硫乙醇酸盐培养基（不含琼脂）     250    用于混浊制品需氧菌无菌试验（GB标准）    
YPD琼脂      250    用于测定酵母菌总数（GB标准）    
小鼠神经干细胞抗生素检定培养基1号（高PH）      250    用于链霉素，卡那霉素，庆大霉素，红霉素等效价测定    
抗生素检定培养基1号（低PH）      250    用于磺苄青霉素效价测定    
抗生素检定培养基2号（高PH）      250    用于林可霉素，克林霉素等效价测定    
玫瑰红钠琼脂       250    用于霉菌、酵母菌计数    
普通琼脂斜面培养基(PH8.0-8.2)      250    分离培养霍乱弧菌，麦迪霉素检定用    
甘露醇高盐琼脂       250    用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养    
抗生素检定培养基4号        250    用于两性霉素B等的效价测定    
小鼠神经干细胞悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮，因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换；而是每 2 到 3 天加料一次，直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞，然后继续培养扩增，或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞，将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。