弱RIPA裂解液

特别提示：包括弱RIPA裂解液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：弱RIPA裂解液
英文名称：RIPA Lysis Buffer(Weak)
产品货号：BTN131008
产品规格：250mL

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表：

产品名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
细胞核转录因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制剂	是	是	是
含磷酸酯酶抑制剂	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zuì终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

备注：
1.为取得zuì佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

除了弱RIPA裂解液,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞与组织裂解液(一氧*氮检测用)
货号：YT045
规格：100ml
本品是一种专门用于一氧*氮或总一氧*氮检测的细胞与组织裂解液。使用本裂解液裂解的样品，可以用于百奥莱博的一氧*氮检测试剂盒(YT286)、总一氧*氮检测试剂盒(YT287)的检测。

本裂解液裂解获得的样品中包含了细胞或组织样品中的大部分蛋白，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度，并可以用于SDS-PAGE和Western印迹检测。需要注意的是本裂解液中不含蛋白酶和磷酸酯酶的抑制剂。本裂解液中添加蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂可能会干扰后续的一氧*氮检测。

本裂解液可以耐受反复冻融。本裂解液如果用于培养于六孔板中一个孔的细胞的裂解，或者用于20mg组织的裂解液，约可以裂解500-1000个样品。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)
货号：SY0319
规格：100ml
本品WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，可以有效维持原有的蛋白间的相互作用。其主要裂解成分为1%的Triton X-100，不含蛋白酶、磷酸酶等抑制剂，裂解得到的蛋白样品可用于Western、IP、CoIP以及许多兼容1%Triton X-100的酶活性或者生物小分子的检测。

注意事项

1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂或不加酶抑制剂。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3）如果WB/IP裂解液得到的蛋白样品是用于酶活性测试或一些生物小分子的检测，需要测试标准品用该裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线，如无显著影响，则可继续使用。
4） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

(一) 细胞样品
1）融解WB/IP裂解液（无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，根据实验目的决定是否添加适当酶抑制剂。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。因为大团细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。

（二）组织样品：

1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解WB/IP裂解液（无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，根据实验目的决定是否添加适当酶抑制剂。
3）按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。