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RT
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大量
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上海机纯实业有限公司
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100ml
产品简介:
负染色又称阴性染色,是由Hall发现的相对于普通染色(即正染色)而言的染色技术。其原理在于利用重金属盐包绕低电子密度的样品,增强样本四周的电子密度,造成细微结构之间的"质量-厚度”差异,增强散射吸收反差,使样品在黑暗的背景上呈现明亮的结构。负染色液有磷钨酸、钼酸铵、印度墨汁等,其中常用的是1~3%磷钨酸。磷钨酸负染色液(5%)适用于显示大分子、细菌、病毒、原生动物、噬菌体、细胞器、核酸大分子、蛋白质晶体及其他大分子材料等,尤其适用于较难染色的样本。染色后的样品图像呈现透明的亮光,而背景图像呈黑色。
磷钨酸负染色液(5%)注意事项:
目的样本尽量新鲜。
样品应为均匀的悬浮液,其纯度和浓度应适宜,否则无法与染色剂之间产生特异和清晰的结合反应。
对于大多数样品的负染,2~3%磷钨酸已经足够,5%磷钨酸可用于较难染色的样本。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验(如重金属盐等)“包埋”低电子密度的样品,结果在图像中背景是黑暗的,而样品像“透明”的光亮。两着之间的反差正好相反,故称为负染色。对颗粒状的生物材料的研究而言,负染色技术较之超薄切片方法具有分辨率高(可达15?魡) 、简单快速等优点。因此在生物学研究中得到越来越广泛的应用,可以显示生物大分子、细菌、病毒、分离的细胞器以及蛋白质晶体等样品的形状、结构、大小以及表面结构的特征,尤其在病毒学中,负染色技术成为不可取代的实验技术。 (一)负染色液的制备 用作负染色的物质应具有:①较强的电子散射能力
Mallory氏磷钨酸苏木素染法(简称P、T、A) 操作方法: (1)固定于Zenker氏固定液的组织,如系10%甲醛固定的组织切片,可再经Zenker氏液处理,如不处理亦可染色,但其结果欠佳 (2)石蜡切片如系Zenker氏液固定的组织,或曾经Zenker氏液处理过的切片,在染色之前需经0.5%碘酒精脱汞,水洗后再经0.5%硫代硫酸钠的脱碘。 (3)经 蒸馏 水洗后,将切片置于0.25%高锰酸钾溶液中5分钟。 (4)经 蒸馏 水洗
片段。在抗体与标本作用后,再加入铁蛋白与抗体结合,从而显示组织内抗原的所在部位。后者则用磷酸钨负染后,直接电镜观察。 二、材料及试剂 1.待检病毒材料 如:粪便,气管分泌物、脑脊髓液、组织培养液等。 2.高速离心机 3.已知抗体 4.磷钨酸 5.琼脂糖 6.其它 三、操作方法 1.经典法 (1)将被检病毒材料0.9ml,加1︰5~1︰10稀释的特异性免疫血清0.1ml充分混合。 (2)置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。 (3)以17 000r/min~23
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