CoolRack M6 热传导模块，灰色，可放置6个1.5m

用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA

室温下对 X 光片曝光 1 分钟。小心操作使得显像后的 X 光片与凝胶能以曝光时方位复原。 5． 用保鲜膜覆盖在放射性自显影照片上。再将带凝胶的玻璃板放在其上，以照片为模板，用刀片切下含标记 DNA 片段的凝胶片。将该凝胶片切成小片（约 1mm2 ）后，放入微量离心管中。 6． 向管中加入 1ml 洗脱缓冲液， 37 ℃连续振荡，温育过夜。 7． 将洗脱液转入两个干净微量离心管中（每管 500 μ l ），然后各加入 1ml 100 ％乙醇，－ 80 ℃放置

GST融合蛋白表达与纯化的实验步骤与注意事项

)-20°C保存beads 11、GST-Pull-down (1)10cm培养皿中，未处理的细胞或者转染的细胞(3-5μg质粒转染10cm培养皿，Cos-7、293T或者其他细胞，转染24h) (2)加入1ml 细胞裂解缓冲液，细胞铲刮下细胞(冰上) (3)将裂解液收集到1.5ml离心管中，振荡30s，冰上放置5min，重复2-3次，充分裂解细胞 (4)4°C，12000rpm，离心15min，收集上清 (5)测定

CDNA文库筛选

摇床上。 11． 将 25 张滤膜转移到一个装有 50ml 杂交液（ 5 × SSPE ； 1 × Denhardt’s 液； 100 μ g/ml cT-DNA ； 0.1 ％ SDS ）的贮存罐内（直径至少 90mm ）， 68 ℃预杂交 2h 。 12． 对于每 ml 杂交液， 2 倍的 105 至 1 × 106 cpm 的双链探针经沸水浴变性 10min 后，迅速放冰上冷却。 13． 变性探针立即加到预杂交混合液中。 14． 在封口的贮存罐内于 68 ℃