细胞介绍
该细胞是由Lozzio从一名53岁的慢性髓细胞性白血病急变期的女性患者的胸水中分离建立的。该细胞曾被认为来源于粒系,处于高度未分化阶段;Anderson等人作了细胞膜特性的研究后,认为该细胞是红白血病细胞系。该细胞是对自然杀伤细胞高度敏感的体外靶标,故而被广泛应用于这方面的研究。K562的原始细胞是一种具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞,能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。该细胞表达CD7(25%)。
细胞特性
1) 来源:骨髓
2) 形态:淋巴母细胞样;圆形,悬浮生长
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,酒精消毒瓶壁并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)将T25瓶中的培养基离心后,去上清,添加6ml新的完全培养基,加入新的T25瓶中继续培养。
4) 如果细胞长满80%请及时进行细胞传代.
5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备IMDM培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。
2) 如果细胞密度达80%,即可进行传代培养。
每2-3天换液,换液可通过添加几毫升新鲜培养基或离心之后去上清液,添加新培养基重悬培养。当细胞密度达到 1 x 106 /mL. 可进行传代。
1. 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类;
1,细胞冻存时,取上清,可使用血球计数板计数。
2,4min ,1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度1-2xE6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。