外泌体提取和DNA分离试剂盒（血清/血浆）

外泌体提取和DNA分离试剂盒（血清/血浆）产品介绍
研究表明，外泌体和其它胞外囊泡中除了含有母细胞来源的不同RNAs外，在外泌体中已检测到基因组DNA和线粒体DNA (Thakur BK et al.2014;Akiko Takahashi,et al.2017; Kalhert et al.2014)，可作为疾病（如肿瘤）的诊断标志物及临床用药的指导和评估等。为了帮助研究人员对外泌体DNA的研究和应用，我们研制了血清或血浆外泌体提取和DNA分离试剂盒。
血清或血浆外泌体提取和DNA分离试剂盒是包括外泌体提取和后续DNA分离、纯化。首先，应用优化的外泌体提取试剂富集血清或血浆中外泌体，然后通过采用优化的裂解液提取外泌体中DNA，通过吸附柱（Spin Columns）可方便、快捷地纯化和洗脱外泌体DNA，可直接用于下游应用，如realtime PCR，基因突变检测，NGS 测序和microarray等。另外，纯化的DNA是来自外泌体中DNA，而不含有血清或血浆中蛋白质结合的DNA(protein-bound circulating DNA)
外泌体提取和DNA分离试剂盒（血清/血浆）保存与应用

【保存条件】

本试剂盒室温下运输，室温或 2-8℃下保存 12 个月（按照试剂盒不同成分分别保存），使用前请充分混匀。

【应用范围】

本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。
本试剂盒提取的外泌体可用于 NTA 粒径分析，Western Blot，核酸提取及其后续分析（Q-PCR，测序等），不建议用于外泌体标记和蛋白质质谱分析等。
外泌体提取和DNA分离试剂盒（血清/血浆）产品介绍
外泌体（Exosome）是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡
（Extrocellular Visicles，EVs）。外泌体普遍存在于多种体液中，其内容物丰富，包括蛋白质、脂质和核酸等，在细胞间信息交流中发挥着重要作用，主要参与免疫抗原呈递，神经递质传递，脂类代谢及细胞信号转导等过程，并与多种疾病的发生、发展、治疗及预后密切相关。
密度超速离心作为传统并有效的外泌体分离方法，但其复杂的操作流程，昂贵的仪器设备，限制了外泌体的常规研究。本公司研制一种外泌体提取试剂，通过优化多聚物混合物与样品混合，经离心可将外泌体沉淀富集，其操作简单，用时短，结果稳定，污染蛋白含量较少，只需普通离心机就可以分离得到较纯的完整外泌体。

外泌体提取和DNA分离试剂盒（血清/血浆）试剂盒组成和说明

本试剂盒只适用于血清或血浆的外泌体提取。

成分 Cat# EXORG50A-1	体积	数量	保存条件
外泌体提取试剂（Exosome Extraction Reagent）	10ml	50 次	2-8℃
样品稀释液（Sample Solution）	20ml	--	2-8℃
纯化柱（Filter Spin Columns）/1.5ml 收集管 （Collection Tubes 1.5ml）	--	50 套	RT
成分 Cat# EXORG30A-1	体积	数量	保存条件
外泌体提取试剂（Exosome Extraction Reagent）	4mL	30 次	2-8℃
样品稀释液（Sample Solution）	10ml	--	2-8℃
纯化柱（Filter Spin Columns）/1.5ml 收集管 （Collection Tubes 1.5ml）	--	30 套	RT

本试剂盒每个反应是基于 250μl 血清或血浆作为外泌体提取样品，可依据外泌体用量做成比例放大，建议最小样品起始用量为 100μl，具体见下表。

样品类型	样品体积	外泌体提取试剂用量
血清或血浆	100μl	50μl
血清或血浆	250μl	125μl

外泌体提取和DNA分离试剂盒（血清/血浆）操作方法

 
 

1. 样本预处理

对于冻存样品，室温或 25℃水浴解冻，将完全融化的样品置于冰上；对于新鲜样品，收集样品后置于冰上，3,000×g，4℃离心 15min，去除细胞或细胞碎片，离心后将上清吸入新管中。

1. 沉淀外泌体

吸取 250μl（至少 100μl ）处理后的血清或血浆放入 1.5mL 离心管（试剂盒不提供），加入等体积（250μl）的样品稀释液，混匀，然后加入 125μl 外泌体提取试剂，颠倒充分混匀后 4℃静置至少 30min。静置后的样品 1,500×g，4℃离心
30min，管底可见白色沉淀，吸去上清，1,500×g，4℃离心 5min，完全去除残留液体，注意不要破坏外泌体沉淀。

1. 外泌体重悬

加入 100ul 样品稀释液，或下游应用所需的相应缓冲液，用移液器反复吹打或漩涡混合均匀，彻底溶解沉淀，此重悬液中含有提取的完整外泌体。

1. 外泌体纯化

将重悬的外泌体转移至纯化柱，放入1.5ml收集管（试剂盒提供，事先已放好）中，2,000×g，4℃离心 5min，弃掉纯化柱，收集管中为提取的外泌体，提取的外泌体可直接应用于下游实验（如，粒径分析、核酸提取等），或者储存在2-8℃保存一周，或者-80℃保存大约三个月。

将重悬的外泌体转移至纯化柱，放入 1.5ml 收集管（试剂盒提供，事先已放好）中，2,000×g，4℃离心 5min，弃掉纯化柱，收集管中为提取的外泌体。提取的外泌体可直接应用于下游实验（如，粒径分析、核酸提取等），或者储存在 2-8℃保存一周，或者-80℃保存大约三个月。